自噬的分子标志物研究论文

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篇1：自噬的分子标志物研究论文

自噬的分子标志物研究论文

在生理状态下, 细胞通过自噬 (autophagy) 清除衰老细胞器和突变蛋白, 以维持自身结构稳定和功能正常。自噬还参与胚胎发育、免疫调节等生理过程。病理状态下细胞自噬水平显著升高, 以耐受缺血、饥饿和凋亡等情况。此外, 自噬功能的障碍还会导致某些疾病的发生。根据细胞内底物运送到溶酶体腔的方式不同, 自噬可分为大自噬 (macroautophagy)、小自噬 (microautophagy) 、分子伴侣介导的自噬(chaperon-mediated autophagy, CMA)。此外, 还有些选择性自噬如线粒体自噬 (mitophagy)、聚集体自噬 (aggrephagy)等。不同类型的自噬其发生过程不同,参与的蛋白分子也不同。检测不同自噬过程中的分子标志物的水平、状态与定位有助于评价细胞的自噬水平。

1 大自噬标志物

大自噬的囊泡膜结构起源于内质网和高尔基体等。这些膜片段形成杯状结构, 包裹胞内物质并最终形成闭合的双层膜的囊泡即自噬体, 然后自噬体与溶酶体融合, 自噬体内蛋白质或细胞器在溶酶体中被溶酶体酶降解。因此该过程的标志物包括自噬体囊泡形成过程的标志物、溶酶体标志物和自噬底物标志物三类。

1.1 自噬体标志物

自噬相关蛋白 (autophagy-related protein, Atg)是一类自噬组成蛋白, 参与调节自噬起始和延伸等过程。其中几个关键蛋白, 也成为自噬标志物。

1.1.1 Atg12-Atg5 复合物Atg12 与Atg5 会形成复合物, 甚至在一些哺乳动物细胞中似乎所有Atg5和Atg12都表现为结合体的形式。Atg12-Atg5 复合物在自噬的形成中至关重要。此外, Atg12-Atg5 复合物还可以充当Atg8-磷脂酰乙醇胺 (phosphatidylethanolamine,PE) 结合系统的E3 样连接酶。Atg12-Atg5 的缺失会导致自噬缺陷。但在短时饥饿状态, Atg12-Atg5 的水平改变并不明显。Atg12-Atg5 复合物的水平检测可采用蛋白质印迹技术 (Western blot) 方法进行。Atg12 分子质量预期为15 kDa, 但在SDS-PAGE 胶上目测大约在19 kDa的位置上。Atg5 分子质量大约为32 kDa。由于Atg12分子质量小, 不易检测, 并且Atg5 与Atg12 的结合是非可逆的, 因此可分别用Atg5 和Atg12 的抗体孵育,然后直接检测Atg12-Atg5 的结合形式, 其分子质量大约在55 kDa 左右。

1.1.2 自噬相关16 样蛋白1 (autophagy related 16-like 1, Atg16L1) Atg16L1 与Atg12-Atg5 复合物相互作用, 并以自身寡聚化的方式形成Atg12-Atg5-Atg16L1 复合物 , 附着在自噬体表面, 在自噬前体膜的延伸中发挥作用。在自噬前体膜完全融合形成封闭的自噬体后, Atg12-Atg5-Atg16L1 复合物被释放到胞质中。在细胞膜转移作为自噬膜供体的过程中, Atg16L1 可作为一个指标, 其定位在自噬体上,但在完整的自噬溶酶体膜上尚未见分布。因此,Atg16L1 可以用来检测早期自噬体的形成。可对Atg5、Atg12 或Atg16L1 进行免疫透射电镜和免疫染色的检测。检测内源性的Atg5、Atg12 或Atg16L1 所形成的点状聚集或斑块可监测自噬的改变。在生理情况下, 内源性蛋白主要是在胞浆中弥散分布的; 而在饥饿等环境应激下自噬被诱导, 则细胞中Atg5、Atg12 或Atg16L1 的点状聚集或斑块会明显增加。

1.1.3 Atg8/微管相关蛋白1 轻链3 (microtubuleassociatedprotein1 light chain 3, LC3) Atg8/LC3是目前研究中被最广泛使用的分子标志物。在酵母中, Atg8 与PE 偶联形成Atg8-PE[5]。LC3 参与了自噬体膜的形成, 包括两种可相互转化的形式即LC3-I 和LC3-II。细胞内新合成的LC3 经过加工, 成为胞浆可溶形式的LC3-I, 后者经泛素化加工修饰, 与自噬体膜表面的PE 结合, 成为膜结合形式的LC3-II。LC3-II定位于前自噬体和自噬体, 是自噬体的标志分子, 随自噬体膜的增多而增加。SDS-PAGE 电泳中, LC3-I 的表观分子质量为18 kDa, LC3-II 的表观分子质量为16 kDa。尽管PE偶联形式的.LC3-II 的分子质量较LC3-I 大, 但是其具有强疏水性, 因此在SDS-PAGE 中电泳迁移率反而比LC3-I (非PE 偶联的LC3) 快。可以通过Western blot比较组间LC3-II 水平, 也可通过计算LC3-II/LC3-I的比值来评价LC3-II 水平, 并推测自噬囊泡数量的多少。LC3 在含SDS 的样品裂解液中易降解, 因此样品经煮沸裂解后应当尽快进行Western blot 实验, 并避免反复冻融。LC3-II 的含量或LC3-II/LC3-I 的比例与自噬体的数量呈正相关, 在某种程度上反映了细胞的自噬活性。但是需要注意的是, 自噬是动态的, 自噬体的聚集可能是自噬活化待降解底物聚集而成, 也可能是自噬效应部分阻断, 自噬体无法被清除导致的。因此仅评价自噬体数量或LC3-II 的表达均不能代表整个自噬过程。只有客观地分析自噬动态变化才能准确地判断自噬活性。基于自噬流 (autophagic flux) 的检测成为反映自噬活性更为可靠的指标。

1.1.4 Atg9/mAtg9 Atg9 是所有Atg 蛋白中唯一的跨膜蛋白, 进化上高度保守, 在酵母以及哺乳动物细胞中都存在。酵母Atg9 存在于30～60 nm 的、来源于高尔基体膜的单层囊泡上, 这些Atg9 囊泡在胞浆快速运动, 并整合到自噬囊泡外膜上。哺乳动物细胞mAtg9 与自噬囊泡存在动态相互作用。在形成成熟自噬体后, mAtg9 并未整合进自噬体囊泡上, 而是又游离进入胞浆。有研究表明, mAtg9 在形成双FYVE 结构域蛋白1 (double FYVE-containing protein 1, DFCP1)阳性的自噬体前体中是必需的, 但不依赖于早期的一些自噬蛋白如UNC-51 样激酶1 (UNC-51-like kinase1, ULK1) 和磷酸肌醇相互作用蛋白2 (WD repeatdomain, phosphoinositide-interacting protein 2,WIPI2)。mAtg9 定位在内体和内体样的部位, 推测其在多种细胞器如再循环的内体间活动, 在自噬的起始进程中发挥极为关键的作用。mAtg9 可用来检测自噬的发生。

1.1.5 Atg6/Beclin1 哺乳动物Beclin1 是酵母Atg6/液泡分选蛋白30 (vacuole protein sorting 30,Vps30) 基因的同源物。Beclin1 主要定位于反面高尔基体 (trans-Golgi network, TGN)、内质网和线粒体。Beclin1 与Vps34 形成III 型磷脂酰肌醇3 激酶复合物 (phosphatidylinositol 3-kinase Class IIIcomplex, PI3KC3) 。Vps34 可磷酸化磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol, PI) 生成3-磷酸磷脂酰肌醇(PI3-phosphate, PI3P), 而PI3P 募集胞浆中其他自噬相关蛋白Atg 结合到前自噬体膜上, 在自噬体形成早期发挥重要作用。磷脂酰肌醇3 激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K) 抑制剂可干扰自噬体的形成。此外, Bcl-2 与Beclin1 结合也可抑制自噬活性。用荧光显微镜或透射电镜可检测Beclin1-GFP 的点状聚集或斑块作为自噬标志物。但Beclin1 自身有核定位信号, 且GFP 融合蛋白的定位受到GFP 的干扰, 因此Beclin1-GFP 荧光显微结果显示有核定位倾向, 可能会影响对自噬状态的评判。在Beclin1 依赖的自噬中, PI3K 活性在自噬体形成中至关重要, 因此在Beclin1 免疫沉淀物中测定PI3K 活性可用来监测其对自噬的调节影响。

1.1.6 Atg14/Barkor Atg14 定位在自噬体上, 其羧基端被命名为BATS (barkor autophagosome targetingsequence) 区域。BATS 区域在Beclin1 招募和自噬活化中意义重大。Atg14 的BATS 区域通过α 螺旋的疏水表面与自噬囊泡膜结合。在应激情况下, BATS 点状聚集或斑块与Atg16 和LC3 以及部分自噬早期标志物DFCP1 重合。Atg14-GFP 或BATS-GFP 在用荧光显微镜或投射电镜技术检测自噬水平时可作为自噬标志物。但除了定位于自噬体, Atg14 也定位于自噬溶酶体和内质网上。因此, 用Atg14 作为标志物时最好也结合用其他自噬标志物做鉴定。

1.1.7 损伤调节自噬蛋白 (damage-regulated autophagymodulator 1, DRAM1) DRAM1 是一个具有六个跨膜结构的疏水蛋白。除了定位于顺面高尔基体, DRAM1 也定位于早期和晚期内体和溶酶体, 它与早期核内体相关蛋白1 (early-endosome-associatedprotein 1, EEA1) 和溶酶体相关膜蛋白2 (lysosomeassociatedmembrane protein type 2, LAMP-2) 共定位。在应激情况下, DRAM1 可被活化的p53 激活。DRAM1 基因沉默会阻断自噬的发生。由于DRAM1分子质量很小, 大约28 kDa, 加之其疏水性强, 蛋白水平检测有一定难度, 可考虑用实时定量PCR 对其mRNA 水平进行检测。

1.1.8 ZFYVE1/DFCP1 锌指FYVE 结构域蛋白1(zinc finger FYVE domain-containing protein 1, ZFYVE1)也被称为双FYVE 结构域蛋白1 (DFCP1), 其羧基端即为两个锌结合的FYVE 结构域。FYVE 结构域参与膜转运和细胞信号, 促进其与含PI3P 的膜结合。ZFYVE1/DFCP1 与PI3P 结合后, 定位于内质网和高尔基体。饥饿诱导DFCP1 转位至粗面内质网的粗粒上, 显示在欧米茄体 (omegasome) 形成的部位。因此DFCP1 可作为自噬形成初期的标志物。DFCP1的表达可用荧光免疫组化方法观察, 出现DFCP1 阳性的点状分布则意味着自噬囊泡正在开始形成期。

1.2 溶酶体标志物

因为自噬过程最终的完成是在溶酶体中进行的,因此溶酶体标志蛋白在自噬功能研究中就显得极为重要。在酸性水解酶的作用下, 进入溶酶体的自噬体内容物被降解。降解生成的可溶性小分子物质经自噬溶酶体膜渗透入细胞质, 参与细胞的物质代谢活动。目前已识别的25 个溶酶体膜蛋白都是高糖基化的。含量最高的膜蛋白就是溶酶体相关膜蛋白1(lysosome-associated membrane protein type 1, LAMP-1)、LAMP-2 和溶酶体整合膜蛋白 (lysosomal integralmembrane protein, LIMP-2)。可用免疫组化或Western blot 的方法检测溶酶体重要膜蛋白的水平,并与其他自噬相关蛋白结合使用。

1.3 自噬底物

p62 也被称为SQSTM1, 在多种细胞和组织中都有表达, 可作为一个货车蛋白参与多种信号转导过程。p62 可连接LC3 和泛素化的底物, 随后被整合到自噬体中, 并在自噬溶酶体中被降解。当自噬被激活时自噬体与溶酶体融合, 自噬囊泡中p62 等蛋白或细胞器被溶酶体酶降解, p62 水平降低; 当自噬被抑制时自噬体积累, p62 水平升高。因此, 可以用Western blot 方法检测p62 的水平, 作为自噬能力变化的指征。

除了与LC3 和泛素化蛋白结合外, p62 可能还参与形成雷帕霉素靶蛋白复合物 (target of rapamycincomplex 1, TORC1)。p62 还与蛋白酶体功能相关。当蛋白酶体功能被抑制时, p62 水平也会增高。此外,p62 也是钙依赖的非溶酶体蛋白酶calpain 1 的底物,因此很难解释它在自噬与死亡检测中的意义。在自噬被激活时, LC3 的上调和p62 的表达下降不一定有明显的关联。尽管p62 可以作为自噬损害或者自噬流改变的辅助标志, 但最好联合其他指标如LC3 进行自噬流的评估。

2 CMA 的标志物

CMA 是胞浆内某些蛋白质被分子伴侣如热休克蛋白质70 (heat shock cognate protein of 70 kDa,HSC70) 识别, 并将其运送到溶酶体膜上, 再经溶酶体膜蛋白LAMP-2a 结合后被转运到溶酶体腔中被溶酶体酶消化的过程。与大自噬和小自噬相比,CMA 的主要特点是细胞质内的蛋白质直接经溶酶体膜蛋白转运入溶酶体腔, 不需形成自噬囊泡。

2.1 HSC70

HSC70 是分子质量为70 kDa 的热休克同源蛋白,它是分子伴侣, 在胞浆识别带有KFERQ 样序列的CMA 底物。HSC70 与定位于溶酶体腔面的Hsp90 相互作用。在HSC70 的帮助下, 底物在穿越溶酶体膜时开始从折叠状态去折叠, 并在LAMP-2a 复合物形成之前完成。将底物转运穿越溶酶体膜还需要定位在溶酶体膜上的HSC70 (lys-HSC70)。HSC70 的稳定性依赖于溶酶体的pH 值。pH 值轻微的上升都会促进HSC70 的降解。

2.2 LAMP-2a

LAMP-2 有3 个亚型, LAMP-2a、LAMP-2b 和LAMP-2c, 借助RNAi 技术显示只有LAMP-2a 才是CMA 途径重要的受体。CMA 的速率直接依赖于溶酶体膜上LAMP-2a 的含量。LAMP-2a 在胞内的水平可由于转录水平改变或降解速率改变而发生变化。抑制LAMP-2a 将引起CMA 底物GAPDH 的聚集; 过表达LAMP-2a, 则引起GAPDH 水平下降。

3 线粒体自噬标志物

线粒体自噬指在ROS、营养缺乏和细胞衰老等内外环境的刺激下, 细胞内的线粒体发生去极化, 而这些被损伤的线粒体将被特异性地包裹进自噬体中并与溶酶体融合, 从而完成损伤线粒体的降解, 维持细胞内环境稳定的过程。细胞主要通过选择性自噬来进行线粒体的更新。损伤的线粒体在发生线粒体自噬之前先发生动力相关蛋白1 (dynamin-related protein 1, DRP1) 介导的线粒体分裂。线粒体膜电位的下降引起PTEN 诱导假定激酶 (phosphatase and tensin homolog-inducedputative kinase 1, PINK1) 的聚集, 接着招募E3 泛素连接酶Parkin 到线粒体。Parkin 促进线粒体膜上蛋白质泛素化, p62 蛋白与线粒体上泛素化蛋白相互作用,借助p62 与LC3 的互作引导线粒体被自噬体包裹。同时, 线粒体上存在自噬受体如BNIP3 (Bcl-2 andadenovirus E1B 19-kD interacting protein 3) 和NIX/BNIP3L (BNIP3-like) 也可以与LC3 互作使得受损线粒体通过自噬方式被去除。研究中通常用线粒体标志物和自噬标志物LC3共定位来显示线粒体自噬。此外, 还有几个线粒体自噬受体也可以考虑用作线粒体自噬的标志。

3.1 Atg32

酵母中, Atg32 是一个分子质量约59 kDa 的跨膜蛋白, 定位在线粒体外膜上。在氨基端有与Atg8 和Atg11 结合的结构域, 在线粒体自噬的发生中作用巨大。Atg11 是个脚手架蛋白, 在选择性自噬中为Atg蛋白的装配提供平台。羧基端可能发挥调节线粒体自噬的作用。抑制Atg32 表达会减少线粒体自噬的效率,同样地, 过表达Atg32 则增加线粒体自噬的效率。研究认为Atg32 是酵母线粒体自噬发生的限速步骤。进一步的研究发现酵母中Atg32 缺失并不明显影响普遍意义上的自噬, 因此认为Atg32 是引导线粒体自噬专属分子。尽管线粒体自噬是进化上保守的现象,但是在哺乳动物细胞中并未发现Atg32 的同源基因。

3.2 BNIP3 和NIX

BNIP3 和NIX 序列上有56% 的同源度, 且都有BH3 结构域, 并与Bcl-2 作用。NIX 与BNIP3 定位在线粒体和内质网上, 通过影响线粒体呼吸和ROS 水平调节凋亡和程序性坏死。BNIP3 插入线粒体的外层膜,其氨基端在胞浆中, 而羧基端在线粒体内。BNIP3 诱导线粒体嵴消失并促进细胞色素C 释放, 同时, NIX和BNIP3 包含有与LC3 结合的LC3 相互作用区域(LC3-interaction region, LIR), 因而也被称为是线粒体自噬受体。BNIP3 的17 位丝氨酸和24 位丝氨酸的磷酸化会促进其与LC3 结合, 易化线粒体自噬的发生。NIX 与Ras 家族小GTPase—Rheb 互作促进线粒体自噬。此外, NIX 可促进Parkin 定位到受损线粒体上, Parkin 又对线粒体膜上蛋白质进行泛素化, 从而引导p62 与LC3 的互作而发生线粒体自噬。

4 小结

自噬标志物的检测在自噬研究中发挥了巨大的作用, 使得人们可以简便、动态、实时并定量地检测细胞内自噬水平。然而单独检测每一种自噬标志物都有一定的局限性和影响因素, 在研究自噬时必须慎重考虑研究条件, 适当设置阴性与阳性对照, 使用多种自噬抑制剂或者基因沉默等技术, 多方面、多层次进行实验以确认细胞的自噬水平。

篇2：研究结核分枝杆菌中自噬的作用论文

研究结核分枝杆菌中自噬的作用论文

从酵母菌到人类，自噬是一种广泛存在的生物代谢过程。早期认为，自噬是宿主细胞在饥饿条件下通过降解受损或衰老的细胞器/蛋白质来补充营养物质。除了物质再循环，自噬在各种生理和病理生理过程中也起着关键作用，如胞质成分的清除、细胞生长、衰老和死亡。此外，自噬也参与协调全身的固有免疫、适应性免疫和炎症反应。结核病( tuberculosis，TB) 是由结核分枝杆菌( Mycobacterium tuberculosis，MTB) 引起的慢性细胞内感染，研究表明自噬参与抗MTB 感染的宿主防御应答。现就自噬在宿主抗MTB 感染免疫应答中的作用进行综述。

1 自噬的细胞和分子水平

自噬是真核生物中高度保守的细胞降解途径，通过消化降解自身胞质成分，实现大分子物质的回收利用。自噬可分为3 类: 大自噬、小自噬以及分子伴侣介导的自噬( chaperonemediatedautophagy，CMA) 。大自噬( 以下称作自噬) 是将胞质蛋白或细胞器包裹形成自噬小体进行降解。自噬可响应于各种胁迫状态，例如饥饿可上调自噬，但营养丰富的条件下自噬也具有本底活性。自噬可以是非选择性( 例如当氨基酸不足时) 或选择性，选择性自噬包括细胞器特异性自噬( 线粒体自噬、过氧化物酶体自噬和内质网自噬) 和异源性自噬( 清除病原体的途径)。一系列体外实验[2]初步阐明了自噬的分子机制，超过30 多种自噬相关基因( autophagy-related genes，ATG) 蛋白产物参与自噬的信号传递与调节: 类线虫51 样蛋白激酶/黏着斑激酶家族相互作用蛋白200 ( Unc-51-like kinase /focaladhesion kinase family interacting protein of 200 kD，ULK/FIP200) /ATG101 /ATG13 蛋白激酶复合物，Vps34 /beclin-1 /Vps15 /ATG14 脂质激酶复合物，这2 种复合物相互作用产生富含磷脂酰肌醇三磷酸( phosphatidylinositol 3，4，5-triphosphate，PIP3) 的吞噬泡; 2 种泛素样蛋白缀合系统( conjugationsystem) : ATG5 /ATG12 /ATG16 复合物和ATG8 /微管相关蛋白1轻链3( microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3)，膜结合的ATG8 为自噬体膜特异性表达，常被用作自噬的检测手段。

2 MTB 的生存策略

MTB 是结核病致病病原菌，MTB 的特征是高感染率和低根除率。MTB 通过阻断吞噬体合成和成熟从而使MTB 在感染的巨噬细胞中长期生存。MTB 使用多种策略避免被杀灭:溶解并从吞噬体逃脱，修饰吞噬体阻碍其成熟，甚至在酸性/被降解的吞噬体中长期生存。自噬是宿主防御MTB 的有效途径之一，自噬可直接消灭胞内MTB，从而限制MTB 的生长。细菌感染可诱发宿主细胞内形成双层膜室( 称为自噬体) ，并同溶酶体融合，降解吞噬的病原体。有研究揭示某些细菌能抑制诱导自噬的信号传递，干扰自噬机制来逃逸或阻止溶酶体和自噬体的融合，利用宿主蛋白掩饰自身以避免被识别，甚至有些细菌主动利用自噬组件来促进自身在细胞内生存生长。MTB 可通过激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mammalian target ofrapamycin，mTOR) 依赖的Wnt /SHH( Hedgehog 的同源基因，Sonic Hedgehog) 信号通路抑制γ 干扰素( interferon γ，IFN-γ)介导的自噬。

3 自噬抗结核感染中的作用

自噬作为固有免疫和适应性免疫通路的下游效应之一，在抗MTB 感染的免疫应答过程中发挥着不可或缺的作用: 传递Toll 样受体( Toll-like receptors，TLR) 等固有免疫受体信号，协同细胞因子发挥防御作用，调节免疫相关GTP 酶( immunityrelated GTPase，IRG) 途径，增强抗原提呈和影响T 细胞的稳__态等。多条宿主防御MTB 的免疫通路激活自噬，现初步明确抗MTB 自噬的亚细胞定位和诱导机制。

3. 1 自噬是病原体相关分子模式( pathogen-associatedmolecular patterns，PAMP) 调控的效应器模式识别受体( pattern recognition receptors，PRR) 主要表达于固有免疫细胞胞膜表面或细胞质中，一种PRR 可识别一种或多种PAMP，其中Toll 样受体是宿主识别病原微生物( 包括MTB) 激活固有免疫防御机制的关键启动点。目前为止，共发现10 个人类TLR 和12 个小鼠TLR。参与识别MTBPAMP 的TLR 主要有: TLR2 ( 与TLR1 /TLR6 形成异源二聚体) 、TLR4 以及TLR9( 识别MTB 的DNA) 。这些TLR 同样参与到抗MTB 的自噬信号通路中，TLR 信号调节固有免疫防御的启动和发展，通过与细胞自噬通路合作消除胞内MTB。抗菌肽是极为重要的针对MTB 的免疫防御物质。MTB表面的脂蛋白可以刺激人类巨噬细胞TLR2 /TLR1，产生抗菌肽，增强维生素D 受体信号转导和提高细胞自噬活性，促进自噬体和溶酶体融合形成自噬溶酶体杀灭细菌。TLR 信号介导的自噬信号转导途径，大致可分为髓样分化因子88( myeloid differentiation primary response gene 88，MyD88) 非依赖性和MyD88 依赖性。脂多糖( lipopolysaccharide，LPS) 是TLR4 的配体，刺激巨噬细胞可增强MTB 吞噬体与自噬体的共定位，LPS 诱导的自噬是MyD88 非依赖性，依赖于TLR4 /含有TIR 结构域的诱导干扰素β 的接头蛋白/受体相互作用蛋白1 /p38 丝裂原活化蛋白激酶( TLR4 /TIR domain-containingadaptor protein / receptor interacting protein 1 /p38 mitogenactivatedprotein kinases，TLR4 /TRIF/RIP1 /p38MAPK) 信号途径，同自噬引起的细胞凋亡通路不同，这条通路并不影响细胞生存。刺激TLR7 可通过MyD88 依赖性途径诱导自噬杀灭胞内MTB，beclin 1 ( 酵母ATG6 同系物) 和Atg5 参与其中。然而，TLR7 并不识别MTB 病原体相关分子模式，但仍能加强宿主细胞对胞内MTB 的清除作用。其他不参与到MTB 的识别作用的PRR 介导自噬的研究也证实了这点。因此即使靶病原体组分不是特定TLR 的配体，但增强其介导的自噬活性仍然能加强对病原体的清除，众多TLR 和其配体激活的自噬在消除胞内MTB 中发挥重要作用。

3. 2 自噬协同细胞因子发挥炎症作用细胞因子在宿主防御MTB 中起到重要作用: Th1 细胞因子IFN-γ、肿瘤坏死因子α( tumor necrosis factor α，TNF-α) 和白细胞介素12( interleukin 12，IL-12) 在抵御MTB 中发挥着作用，Th2 细胞因子IL-4 的水平，与疾病严重程度相关。一系列细胞因子和自噬相关的研究表明，Th1 细胞因子活化自噬，而Th2 细胞因子抑制自噬。IFN-γ 对宿主抗MTB 至关重要，在小鼠中，IFN-γ 介导诱导型一氧化氮合酶( inducible nitric oxide synthase，NOS2) 通过生产NO 抑制MTB 的生存，同时激活自噬来克服MTB 引起的吞噬体成熟障碍。对TNF-α 诱导的自噬抗MTB 的机制研究则更为深入，TNF-α 通过阻断蛋白激酶B ( proteinkinase B，Akt) 导致mTOR 的失活从而促进细胞自噬水平，AGT4 和活性氧( reactive oxygen species，ROS) 参与其中。IL-4 和IL-13 是两种典型的Th2 细胞因子，可以抑制NO 的产生，衰减巨噬细胞对胞内MTB 的杀灭能力。体外实验中，IL-4 和IL-13 拮抗自噬以及其对MTB 的杀灭作用。IL-4和IL-13 抑制饥饿诱导的自噬是通过依赖Akt 信号通路，然而Akt 信号并不参与IFN-γ 诱导的自噬。抗自噬效应蛋白Bcl-2和Bcl-XL 参与IL-4 和IL-13 介导的抑制自噬作用，机制是Bcl-2 和Bcl-XL 可以同beclin 1 直接结合，从而阻断自噬的进程。总的来说Akt 信号参与到抑制饥饿诱导的自噬，而STAT6 信号途径参与到抑制通路IFN-γ 诱导的自噬。IL-10和IL-6 也被发现能够抑制自噬，在MTB 感染的THP-1 细胞中，IL-6 通过降低ATG12 /ATG5 复合物的表达，阻碍自噬体的合成而发挥抑制效应。MTB 可以上调IL-6 的生产，抑制自噬，以维持自身的生存，mTOR、p38MAPK 和c-Jun 氨基末端激酶( c-Jun N-terminal kinase，JNK) 信号通路参与其中。IL-10 抑制雷帕霉素诱导的自噬作用依赖Akt 和信号转导子和转录激活子3/6( signal transducer and activator of transcription 3/6，STAT3/6) 途径，而拮抗饥饿诱导的自噬是依赖于1 型磷脂酰肌醇3-激酶( phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K) /Akt 信号，小鼠巨噬细胞中，也观察到IL-10 抑制LPS 诱导的自噬作用。阻断自噬将抑制TNF-α 的分泌，增强促炎分子( 如IL-1β 等)的产生，激活自噬能够促进TNF-α 诱导的核因子κB( nuclear factor-Kappa B，NF-κB) 活化和细胞间黏附分子1( intercellular adhesion molecular 1，ICAM-1) 的表达，这表明细胞因子同自噬条件作用或许是相互的。

3. 3 IRG 参与自噬的抗菌作用在对IFN-γ 诱导自噬抗MTB 的精确机制研究中，发现IRG 参与其中。在小鼠研究中证实IFN-γ 的刺激使包含MTB的吞噬体能够募集免疫相关GTP 酶M1 ( immune-relatedGTPase M1，IRGM1)，Irgm1 是小鼠IRG 家族的一个成员。Irgm1 对吞噬体的作用机制仍然是模糊的，甚至Irgm1 对自噬的影响可能是双面的，一方面同IFN-γ 协同作用，以促进抗菌响应，另一方面Irgm1也负调节IFN-γ 介导的自噬，限制免疫细胞的`自噬效应。人类基因组中有3 种IRG 旁系同源物，即IRGC、IRGQ和IRGM，但是只有IRGM 是有功能的。该IRGM 基因位于染色体5q33. 1，且有5 个外显子。第一外显子较长编码181 个氨基酸; 4 个较短的外显子从所述第一外显子向下游延伸超过50 000 bp 。多项分子流行病学研究表明IRGM基因的启动子区域的变化，显示出与MTB 感染的风险增加有关。结核病易感性同IRGM 多态性有关，并与多种参与调节自噬过程的其他基因关联。然而，包括宿主的种族、MTB 的种属和地理环境等多种因素均可影响MTB 敏感性。因此需要更多的研究( 包括体内模型) ，才能正确评估自噬相关基因多态性与结核病易感性之间的关系。

3. 4 自噬在抗原提程和T 细胞稳态中的作用T 细胞通过监测由抗原提呈细胞提呈的抗原肽来调节适应性免疫应答作用。主要组织相容复合体( major histocompatibilitycomplex，MHC) Ⅱ类分子提呈的抗原由CD4 + T 细胞识别。自噬能间接或直接增强MHCⅡ类分子对抗原的呈递作用，在巨噬细胞和树突状细胞中TLR7 和TLR9 等有效的上调由卡介苗抑制的MHCⅡ表达，自噬可以协同TLR 免疫效应增强抗原特异性CD4 + T 细胞的活化。此外，在感染了MTB 的小鼠巨噬细胞和CD11 + 树突状细胞表面，用雷帕霉素上调的自噬能够直接增加MTB 分泌抗原Ag85B 抗原递呈。自噬除了通过影响抗原呈递调控T 细胞应答外，能直接作用T 细胞，包括调节T 细胞内环境稳定、活化和死亡。在胸腺T 细胞中，从双阴性到单阳性细胞发展的各个阶段，均检测到自噬活性。自噬对胸腺祖细胞的生存是必要的，Atg5缺陷的人重组激活基因2( recombinant human activated gene 2，RAG2) 和beclin1 基因缺陷的RAG1 - / - 嵌合体存在大大降低了胸腺细胞的总数。外周T 细胞中也显示出自噬的本底水平，T 细胞受体( T cell receptor，TCR) 配体的激活可以上调这种水平。在激活的Jurkat T 细胞中，NF-κB 介导的beclin1基因表达上调，支持了TCR 配体激活的自噬可以增加beclin1的表达。磷脂酰肌醇3 激酶催化亚基3 型( phosphatidylinositol3-kinase，catalytic subunit type 3，Vps34 ) /beclin1 复合物在T 细胞调控自噬的作用是矛盾的结果。在一项研究中，Vps34 缺陷的T 细胞保有自噬活性，但表现出IL-7 受体的缺失，从而降低细胞的存活。然而在不同的基因敲除模型，显示Vps34 对激活T 细胞中的自噬是必须的。因此T 细胞中自噬的活化可能存在2 种途径即Vps34 /beclin1 依赖的经典途径和非依赖Vps34 /beclin1 途径。

4 自噬相关的抗MTB 治疗及展望

自噬与MTB 感染有着复杂的相互作用，深入的体内外研究为将抗MTB 药物带来新的见解。自噬的治疗意义为临床研究提供新的策略: 完善抗结核化疗传统方案，老药新用，将免疫治疗与自噬相结合等。例如，常用的抗结核药物异烟肼和吡嗪酰胺能够促进自噬的激活。雷帕霉素( mTOR 抑制剂) 能够引起mTOR 信号介导的自噬，在巨噬细胞的研究中表明，高剂量雷帕霉素能够有效杀灭分枝杆菌，然而低剂量的mTOR 抑制剂效果不明显。他汀类药物是常用的降胆固醇药物，它们也可以影响免疫应答。他汀类药物治疗通过促进自噬和吞噬体成熟从而杀灭人类和小鼠巨噬细胞中的结核杆菌。雷帕霉素、他汀类药物或维生素D等药物可能会通过诱导自噬提高MTB 的治疗但长期或过量的自噬能增加细胞死亡，通过激活自噬来改善结核病治疗的最佳方式需要进一步研究。DNA 疫苗是很有前途的新一代疫苗，可以通过DNA 编码目的抗原引发特异性免疫应答。抗MTB Ag85B DNA 疫苗的研究中，与细胞自噬相结合的DNA疫苗疗法能显著增强Th1 型细胞因子( IFN-γ 和IL-2) 表达和CD4 + T 细胞免疫效应，利用自噬途径或许代表了抗MTB疫苗接种一个新兴的方向。研究MTB 免疫机制和ATG 蛋白质之间的相互作用一直是近年来研究的主要焦点，大量的研究将使人们更好地理解细菌逃逸自噬的机制，并将其用于治疗MTB 感染的未来药物设计中。

篇3：车载自称重方法研究论文

车载自称重方法研究论文

摘要：针对传统车辆称重装置存在的不足，该文提出了车载自称重系统的总体思路，介绍了利用钢板弹簧变形量测整车质量、基于轮胎状态的车辆载重检测2类方法，通过选用适当的传感器，利用一定的算法计算出车重。该研究对治超限超具有较好的实际应用价值。

关键词：车辆称重 称重传感器 治超限超

0.前言

对利益的追逐使很多运输人员无视法规，严重超载，对自身和他人人身安全和财产安全造成了严重威胁，也急剧缩短了公路的使用寿命。因此，治理超载运输势在必行。要治理超限，首先就必须对车辆进行超限测量，判断是否超载及超载量。

1.国内外治超限超状况

在过去相当长时期内，磅秤一直是车辆超载检查的唯一技术装备，其称重效率低，对车辆正常营运造成了影响，随着超载现象的日趋严重和交通量的增长，这种传统检测手段已难以达到监测的目的。90年代基本上形成了成熟产品即动态的轴重检测装置WIM(weigh-in-motion)，可以克服静态磅秤耗时长和应用范围有限等缺点。 如今国内在治理超限运输方面，多数采用价格便宜、使用灵活、机动的便携式轴重检测仪。便携式轴重仪的大量应用，大大推动了该行业的发展。

动态式称重系统只是一种被动治理超载现象的措施，并且受速度(一般小于5或10km/h)等随机因素影响比较大，精度难保证。因此，设计一套不限制车辆正常行驶的高速检测系统，快速、自动地判别超限运输车辆的重要性更显突出。由此本文提出车载式自称重技术。

2.车载自称重系统总体思路

该车载式自称重系统作为车辆的一部分，可以适时地采集相关信号，并把该信号传送给处理器，从而得到了车辆自身重量，实现了自动测量，然后通过通信层将该车重量信号传输给相关管理部门，从而实现了对车载超载的智能化远程管理。

测量部分作为系统的核心部分，可以完成数据采集、A/D转换、数据处理和分析，并通过一定的算法完成车辆自身的计算，并有数据的保存和上传提取功能，对采集和处理过的数据备份保存，以供管理软件使用。该部分实施方案如下：

(1) 对钢板弹簧的结构和性能进行动力学分析、强度刚度计算等，为后续工作提供理论依据;

(2)通过建模仿真，确定传感器安装位置的受力情况，建立理论标定值表。实验加载测敏感点的实际受力情况，建立试验标定值表;

(3)对理论和试验标定值表进行数据处理，得到标准标定值表，并储存到特定存储器中;

(4)测量过程中，将传感器测得的信号与标准标定值表对照，可快速准确地得到车载重量。

3.测量方法

常见的测量方法由利用钢板弹簧变形量测载重和基于轮胎状态的检测方法。

3.1利用钢板弹簧变形量测整车质量

3.1.1.基于车辆电容称重传感器测量钢板弹簧形变进行称重

(1)优点：电容称重传感器具有测量电路机械结构简单、抗干扰性好等特点，静态测量时重复性误差及非线性误差较小，动态测量时车辆速度、加速度及振动对测量结果影响较小。利用软件补偿方式进行非线性补偿及迟滞性补偿效果明显，可保证静态称重误差小于2%。

(2)原理结构：在载荷作用下钢板弹簧产生变形，电容传感器两极板距离发生变化，传感器的电容值也随之变化。利用预先的标定(即传感器电路输出电压值与该轮轴载荷值之间的关系)，就可以得到该轮轴的载荷质量。将各轮轴的载荷质量相加便得到整车载荷质量。

以有两轴的车辆为例，电路框图及电容传感器安装。前后传感器将载荷的变化转变为电容的变化;电容测量电路将电容值转换为电压值;单片机将传感器输出的`电压值进行A/D转换，经数据处理后，将载荷值送给数字显示器;当车辆载荷超载时，输出点火控制信号。

电容上极板部件中包括电容上极板和上屏蔽板，安装在车架下部，左右居中;电容下极板部件包括电容下极板和下屏蔽板，安装在轮轴中部的上方，电容两极板面相对且上下对正，屏蔽板接电容测量线路的地，车辆的每根轮轴上方均安装一套电容传感器。

3.1.2基于应变式电阻传感器测弹簧钢板形变进行称重

由于钢板弹簧弦长的变化与车辆的载重成线性关系，可知，钢板弹簧中的一固定小段 AB的长度变化也与车辆的载重成线性关系。因此，可通过检测AB的长度变化得到车辆的载重信息，此处长度的变化我们用电阻应变片来检测。

应变式电阻传感器测得弹簧钢板形变信号，经 AD转换模块送入车辆微型计算机处理系统， 得载重信息。

3.2基于轮胎状态的车辆载重测量

工作原理：通过研究汽车行驶时轮胎载荷与气压、温度之间的关系， 建立了三者的数学模型。依靠安装在轮胎内的传感器检测轮胎内部的温度和压力， 并判断其是否超出了规定值及超出量，进一步计算出载重。

前置信号调理电路把微弱的传感器输出信号放大，并滤除其中的噪声，A/D转换电路把来自传感器的模拟信号转换为数字信号，送入单片机进行运算。单片机根据各轮胎压力值等信号， 对原始信号进行低通滤波，并使用算法消除由于路面不平度对车辆引起的动载荷影响，计算出各轴的轴载信号，从而判断车辆是否有超载的情况[5]。

该测重系统成本低，但由于轮胎状态受环境影响比较大，并存在漏气等情况，测量精确度不高。

4.结论

由于传统测重存在很多弊端，本文提出了车载式称重的思路，并介绍了比较实用的测量方法，即根据钢板弹簧的形变量与负荷间存在一定关系，利用电容称重传感器或应变电阻传感器完成钢板弹簧的形变测量，并简单介绍了基于轮胎状态的车辆载重测量方法。

参考文献：

[1]杜润祥.国内外机车车辆称重技术发展状况与对策[J].铁道车辆，，3：13-14

[2]林颖.基于ARM的车辆称重系统[J].仪表技术与传感器，，3：28-31

[3]刘伟.车辆载重检测方法及载荷计量模型研究[J]. 拖拉机与农用运输车，，1：47-50

[4]徐树山.车辆电容称重装置研制[J]. 仪器仪表学报，2008，5：973-976

[5]孟庆华.无线传输的轮胎状态及车辆载重检测一体化技术[J]. 农业机械学报，2008，6：46-49

篇4：详谈自噬在脑缺血性损伤中的作用论文

详谈自噬在脑缺血性损伤中的作用论文

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后，通过溶酶体途径降解细胞内物质的统称，是近年来逐渐被认识的细胞除坏死和凋亡外的第3种死亡方式。在通常情况下，自噬在多数细胞内都处于一个相当低的水平。当细胞受到外界因素刺激，如饥饿、缺氧、高温或损伤、过多的细胞器和胞质成分积聚等多种情况下，则会产生过度自噬。脑缺血是由于脑组织血流不足，脑细胞代谢障碍，最终导致脑细胞不可逆性损伤和死亡的一系列病理生理学过程。近年来，众多研究表明，自噬参与了脑缺血损伤的发生、发展过程。现就自噬在脑缺血性损伤中的作用综述如下。

1 自噬的形成过程及分子机制根据细胞物质到达溶酶体腔途径的不同，自噬可以分为大自噬、小自噬以及分子伴侣介导的自噬3种形式。我们通常所说的“自噬”主要指大自噬，其过程可以被人为地分成4步，包括自噬的诱导、自噬体膜的形成、自噬体的形成、自噬体与溶酶体的融合以及内容物的降解。第1步，营养物质丰富(如复糖复氧)的情况下，雷帕霉素靶蛋白C1复合物(mTORC1)与哺乳动物同源物ULK复合物ULK1/2mAtg13FIP200Atg101结合，促使ULK1(或ULK2)磷酸化及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶自噬相关基因13(autophagyrelatedgene13，Atg13)mAtg13的高度磷酸化，从而对自噬的诱导产生抑制作用。但是当环境营养不足(如缺糖缺氧)的情况下，mTORC1与ULK复合物ULK1/2mAtg13FIP200Atg101分离，使mAtg13去磷酸化，自噬诱导开始。第2步，磷脂酰肌醇三磷酸激酶(phosphatidylinositol3kinase，PI3K)分为Ⅲ型，其中Ⅰ型PI3K抑制自噬的发生，而Ⅲ型PI3K促进自噬的发生。PI3K复合物由Beclin1(Atg6的同源物)、Ⅲ型PI3K和p150(Vps15的同源物)组成，募集胞质中含FYVE或PX基序的蛋白质，用于自噬体膜的形成。第3步，Atgl2由El样酶Atg7活化，之后转运至E2样酶Atgl0，最后与Atg5结合，形成自噬体前体[。微管相关蛋白轻链3(microtubuleassociatedprotein1lightchain3，LC3)在半胱氨酸蛋白酶Atg4的`作用下脱去羟基端变成LC3Ⅰ，随后LC3Ⅰ 被Atg7激活并转位到Atg3，在Atg3的作用下与PE连接并酯化形成LC3Ⅱ，定位于自噬体的内膜和外膜，形成完整的自噬体。因此，常把LC3Ⅱ/LC3Ⅰ作为自噬的标志蛋白。第4步，自噬体与溶酶体的融合需要溶酶体相关膜蛋白1(lysosomalassociatedmembraneprotein1，LAMP1)、LAMP2和lGTPaseRab7，但是具体的作用机制目前还不清楚。融合后，内容物开始降解，其过程主要依赖一系列溶酶体水解酶，包括组织蛋白酶B、D、L，最后内容物降解产物通过溶酶体透性膜转到胞液中被重新利用。

2 脑缺血后自噬的诱发因素脑缺血后自噬的诱发因素包括由大量活性氧、自由基的释放引起的氧化应激，通过上调自噬相关蛋白LC3、Beclinl表达从而诱导细胞自噬;内质网应激即内质网(ER)内稳态失衡后，未折叠蛋白或错误折叠蛋白在ER积聚，通过对自噬相关信号通路哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin，mTOR)抑制后诱导细胞的自噬;海马神经细胞的JNK活性增强后通过引起神经细胞兴奋性毒性进而诱导自噬和凋亡等。程序性死亡方式包括凋亡与自噬，二者作用交叉。其中Bcl2、Bclxl、Bax、caspase家族等基因称为凋亡相关基因，Bcl2蛋白水平下降能引起自噬激活，caspase对细胞自噬也具有十分重要的作用，它们可以裂解自噬相关蛋白，裂解后的蛋白碎片具有促进细胞凋亡的作用。

3 参与脑缺血后自噬的主要信号转导通路自噬的调节较为复杂，有多条信号通路参与，其中主要包括mTOR、AMPKmTORC1信号通路、核因子NFκB、丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinase，MAPK)介导的信号通路等。

3.1 PI3K/AktmTOR信号通路

mTOR是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，包括mTOR复合物1(mTORcomplex1，mTORCl)即雷帕霉素敏感型和mTOR复合物2(mTORcomplex2，mTORC2)即雷帕霉素欠敏感型。mTORCl是自噬的主要调节靶点，其主要调节因素包括糖和高能量状态、各种应激以及该通路的上游信号分子;雷帕霉素和氧糖剥夺等引起的缺血缺氧情况下可稳定RaptormTOR的连接，抑制mTORCl的激酶活性，从而促进自噬。上游信号分子主要包括PI3K/Akt中相关通路，正常情况下Beclinl可使PI3K活化，从而使得Akt在细胞膜上聚积;此时，Akt出现磷酸化，促进肿瘤抑制基因TSC2编码的蛋白磷酸化，激活raptormTOR复合物和mTORCl的激酶活性，从而抑制自噬。脑缺血损伤后，缺血缺氧刺激激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferatoractivatedreceptorγ，PPARγ)，抑制Beclinl活性后，抑制PI3K和Akt的活性，从而抑制mTORCl的激酶活性，因此产生自噬。

3.2 AMPKmTORC1信号通路

一磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPactivatedkinase，AMPK)是能量传感器，主要由催化亚基α和调节亚基β、γ组成，真核细胞内的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶即是AMPK。大脑中大量存在催化亚基α1、α2，在能量缺乏如缺血缺氧等情况下被迅速激活，进而产生一系列的症状。LKB1激酶和Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶激酶β(Ca2+/calmodulindependentprotein kinasekinaseβ，CaMKKβ)属于AMPK的上游激酶。有研究发现，上调AMP/ATP比值或者升高Ca2+的浓度时，CaMKKβ会出现磷酸化，从而产生磷酸化的AMPK(pAMPK)，进而抑制TSC1/2和mTORC1的活性产生自噬，调节该过程的还包括mTORC1的底物S6K1。Wang等研究证实抑制自噬相关信号通路mTOR的活性产生自噬后，其下游众多的靶蛋白及信号通路如mTORC14EBPs激活和TSC2mTORS6K1抑制，影响蛋白质翻译、核糖体合成等代谢过程，从而参与脑缺血/再灌注后神经细胞的自噬性死亡或加重细胞的自噬性损伤。

3.3 NFκB信号通路

哺乳动物核因子(NF)κB的家族成员包括p50/p105(NFκB1)、p52/p100(NFκB2)、cRel、RecB、p65(RecA)等。正常情况下，NFκB位于胞质中并与其抑制蛋白(IκB)紧密结合。当细胞受到缺血缺氧等因素刺激时，激活后的NFκB从胞质转移到胞核中，进而上调p62蛋白的表达，从而使得p53、IκBα和Bcl2表达减弱，自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclinl的表达增强，从而产生自噬。Li等为了诱导局灶性脑缺血模型，采用NFκB基因敲除小鼠，并对其大脑中的动脉远端分支结扎，结果发现NFκB途径可调控脑缺血诱导的自噬样损伤。Cui等研究发现在大鼠海马区经过缺血/再灌注损伤后，信号转导通路NFκBp53参与损伤处相关的自噬与凋亡。

3.4 MAPK介导的信号通路

细胞外信号调节激酶(extracellularsignalrelatedkinase，ERK)、氨基末端激酶(JunNH2terminalkinase，JNK)和p38构成了MAPK。mTORC1是其下游调节分子，有研究发现，在脑缺血/再灌注中的缺血缺氧刺激下，MAPKmTOR信号通路能够降低LC3、Beclin1和抗胸腺细胞球蛋白等自噬相关蛋白的水平，使得ERK、Akt、磷酸肌醇依赖性激酶(PDK1)的活性受到抑制，进而激活mTOR、JNK、p38、蛋白丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶(PTEN)的活性，从而产生自噬。

3.5 其它

此外，调节和诱导自噬的途径还包括信号转导通路p53，Ras/蛋白激酶A(PKA)和毛细血管扩张性共济失调突变蛋白激酶(ATM)mTOR，以及Bcl2与Beclinl复合体等。

4 自噬在脑缺血性损伤中的作用研究证明，细胞损伤的严重程度直接关系到自噬在脑缺血性损伤中的作用。在轻度饥饿、缺氧等情况下，自噬不仅通过降解蛋白提供能量，而且能够通过降解损伤的蛋白后合成新的蛋白，从而保护着机体的细胞。若重度饥饿、缺氧，或延长细胞损伤的时间，激活凋亡相关调控蛋白产生凋亡后，自噬也过度激活，过度激活的自噬又进一步促进凋亡的发生，从而对机体产生损伤作用[3]。

4.1 自噬减轻脑缺血损伤

有研究表明，自噬可保护神经细胞，减轻缺血性损伤。Carloni等通过对新生1周SD大鼠脑部缺糖缺氧后发现，短时间内即可产生自噬，用自噬抑制剂三甲基腺嘌呤(3methyladenine，3MA)和渥曼霉素(wortmannin，WM)抑制自噬后，坏死的细胞数量增多，而自噬激动剂雷帕霉素使细胞坏死和凋亡明显减少，且证明是通过PI3KAktmTOR通路对缺血后的损伤发挥保护作用。Chauhan等通过建立大鼠局灶性脑缺血模型和原代海马神经细胞缺糖缺氧损伤即氧糖剥夺(oxygenglucosedeprivation，OGD)模型，并采用MRI成像观察，发现大鼠缺血后1h腹腔注射雷帕霉素可以使得脑梗死的体积减少，过氧化物歧化酶、谷氨酸等的释放受到抑制，海马神经细胞OGD后产生自噬并一直能持续至复糖复氧后的48h，用自噬抑制剂3MA抑制自噬后，OGD模型的损伤加重，进而从体内和体外水平证明自噬对该细胞造模后的损伤具有保护作用。Sheng等证实缺血预适应(ischemicpreconditioning，IPC)可诱导神经细胞自噬，自噬抑制剂抑制自噬后可增加脑的梗死体积和水肿程度。而自噬激动剂雷帕霉素作用后的效果则相反，其保护作用的发生过程主要通过IPC的直接保护神经细胞以及上调热休克蛋白70(heatshockprotein70，HSP70)的表达，并已证实HSP70对细胞具有保护作用。Yan等对大鼠制备高压氧预适应模型，发现自噬激动剂雷帕霉素产生自噬后，能模拟高压氧预适应的生物学效应，从而减轻脑缺血性损伤。Balduini等研究发现，缺血缺氧等应激状态下的细胞存活较低，若自噬发生后，其存活率会明显提高，因此认为自噬在应激状态下对细胞产生保护作用。丁培炎等以短期禁食诱导大鼠脑局灶性缺血/再灌注模型，研究其损伤的作用，发现短期禁食后产生自噬，自噬能减轻该模型引起的损伤作用，因此证明该模型中自噬对细胞具有保护作用。Wang等研究脑缺血后自噬产生神经保护作用的主要机制，发现烟酰胺转磷酸核糖激酶和ARRB1/βarrestin1是其分子机制的主要作用基础，且该分子同时作用于BECN1与自噬。高博等通过制备局灶性脑缺血预适应模型，采用两次插入线栓法引起内质网应激并诱导出自噬，发现自噬在该模型中起保护作用，且用内质网应激抑制剂SAL能阻断该保护作用，猜测SAL阻断内质网应激后，抑制了自噬的活性，从而阻断了相关的保护作用。王燕梅等通过短暂全脑缺血和短暂全脑缺血-低氧处理建立短暂全脑缺血模型后，比较海马CA1区中自噬相关蛋白LC3、LAMP2和组织蛋白酶D的蛋白表达情况，发现低氧后处理产生的自噬对短暂全脑缺血起保护作用。

4.2 自噬加重脑缺血损伤

另有研究证实，自噬可加重脑缺血损伤。Wen等通过对大鼠建立永久性脑缺血模型，发现缺血后即能产生大量的自噬，并且自噬抑制剂3MA和组织蛋白酶抑制自噬后，脑梗死体积减少，神经自身修复功能增强，提示该损伤产生的自噬可加重脑缺血引起的损伤。Puyal等对新生12d的大鼠通过短暂性左侧大脑中动脉闭塞(transientmiddlecerebralarteryocclusion，tMCAO)造成局灶性脑缺血，发现损伤后可产生细胞的坏死、凋亡和自噬，在再灌注起始及3h后注射自噬抑制剂3MA，自噬抑制并且脑梗死体积明显减少，因此认为自噬在局灶性脑缺血损伤中可加重脑缺血损伤。Wang等建立大鼠全脑缺血模型，并观察海马CAI区神经细胞，发现自噬抑制剂3MA在缺血前1h或0.5h加入，全脑缺血引起的神经元损伤能明显减轻。Zheng等利用RNA干扰技术(RNAinterference，RNAi)使得脑缺血大鼠体内自噬相关基因Beclinl表达下调，自噬抑制，皮质和纹状体处神经细胞损伤减轻，能抑制神经细胞的凋亡并可观察到大量神经细胞再生，提示自噬在该模型中可加重脑缺血损伤。Koike等利用ATG7缺陷的新生小鼠制作脑缺血模型，抑制了脑缺血中产生的自噬，结果发现ATG缺陷可保护脑缺血后海马区神经细胞引起的一系列损伤。石秋艳等对大鼠大脑中动脉缺血1d、3d、5d后再灌注，观察该时间对海马自噬的影响，结果发现自噬水平下调后缺血/再灌注损伤减轻。Xu等发现抑制自噬后，可减轻脑缺血后的神经损伤，且PPARγ的激动剂15脱氧前列腺素J2(15deoxyprostaglandinJ2，15dPGJ2)是其发挥神经保护作用主要分子基础。Shi等对原代皮质神经元细胞和人神经上皮瘤细胞(SHSY5Y)模拟体外脑缺血模型，发现自噬在缺糖缺氧6h后，复糖复氧24、48和72h后产生，并且该模型使得自噬过度激活，从而引起脑缺血后相关的神经细胞死亡，加重脑缺血引起的损伤。Jiang等研究表明，自噬抑制剂3MA抑制自噬后，脑缺血产生的一系列炎症可通过NFκB通路调节抑制，从而减轻了脑缺血后的损伤。Gao等研究表明脑缺血损伤后，抑制自噬相关的信号通路可减轻该损伤，并产生神经保护作用。

5 结语

综上，自噬既有利又有弊。自噬适度能使体内异常蛋白质及受损或过多的细胞器得到清除，从而维持着细胞的存活、分化、发育和稳态;而过度的自噬，可引起自噬性细胞死亡，并和细胞死亡的另两种形式凋亡、坏死交互作用，使细胞损伤加重。因此，研究脑缺血后自噬的相关作用，了解自噬的发生、发展过程，认清自噬发生的相关调节因素及信号通路，有助于根据自噬的特点和功能，针对脑缺血的治疗方式，发现新的治疗靶点和策略。

篇5：谈自噬在肿瘤中的作用及运动干预的影响论文

谈自噬在肿瘤中的作用及运动干预的影响论文

1 自噬

1.1 自噬的基本机制

最近几年,很多学者开始倾向于对自噬的研究。通俗的解释,自噬是细胞依从于溶酶体进而降解机体受损的细胞器、蛋白质和一些大分子物质的过程。通过它的自吞噬作用来保护细胞的稳态,并为健康细胞提供能量。前人大量研究表明,自噬对预防缓解衰老、癌变、神经退行性病变、病理感染等皆有非常重要的意义。自噬对肿瘤而言也是一把双刃剑,有双重作用。自噬家族成员很广泛,有30多种自噬相关蛋白(autophagy related gene,Atg)和50多种溶酶体水解酶。与自噬相关的最重要的信号传导通路有3种:I型磷脂酰肌醇3激酶(P13K)通路、Ⅲ型P13K通路和腺苷酸活化蛋白激酶FLKBl/AMPK)通路。

1.2 自噬的分类及过程

依赖溶酶体降解有害物质的途径不同,可将自噬分为以下3种类型:大自噬(macroautophagy)、微自噬(microautophagy)和分子伴侣介导自噬(chaperone-mediated autophagy )。

(1)人们平时广泛提到的自噬指大自噬:它的膜起初源自于内质网之后形成双层膜发挥效应包被待降解物质(细胞器、部分胞质以及蛋白质等成分)形成自噬小体,自噬小体与胞内体结合后进一步成为中间自体吞噬泡,中间自体吞噬泡又与溶酶体融合(主要是外模与其结合)形成降解自体吞噬泡然后降解其包含的内容物,降解的产物一部分可被循环利用,为细胞提供养料。

(2)小自噬:它是由溶酶体膜直接内陷包裹胞质成分,形成囊泡,而后降解。

(3)分子伴侣介导的自噬:仅存在于哺乳动物中,具有特异性,待降解的物质必须与之相应受体结合才能被运送至溶酶体进行降解,例如:热休克蛋白70(heatshock cognate protein 70,HSC70),它必须与有特定序列的可溶性蛋白结合,从而进入溶酶体被降解,CMA的底物都是可溶的蛋白质分子,胞质中有30%的蛋白质有一个识别HSC70的五肽序列——KFERQ,它们可由CMA形式被降解。

1.3 自噬自身的信号调控机制

细胞自噬与正常人体生理活动之间存在一个动态平衡,通过一些信号调控的途径以维持人体的稳态环境,目前已知自噬的经典信号调控通路有以下几种。

(1)mTOR信号通路:mTOR的敏感性很强,容易受到细胞因子、营养素以及对其有敏感相关信号通路的调节,相关信号通路主要是调节细胞自噬的活性进而在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,且mTOR主要作用于细胞自噬发生的起始阶段。

(2)PI3K信号通路:P13K是mTOR重要的上游信号调节通路,通过动物模型研究证实,AKT可能参与PI3K的自噬活性调节,AKT的激活或抑制可以分别引起细胞自噬活性的降低和升高。P13K的类型分为两种:I型P13K和III型P13K,他们对于自噬活性的调节具有完全不同的作用。I型P13K活化产物PIP3可以通过激活AKT抑制细胞自噬,并且研究发现抑癌基因PTEN可以通过阻碍P13K通路来促进自噬;而III型P13K产物PI-3-P则可以促进自噬的发生。

(3)P53:P53是肿瘤抑制因子,细胞核中P53主要通过AMPK及TSC1/2途径抑制mTOR进而诱导自噬,而胞质P53与FAK家族激酶相互作用与蛋白2 0 0(P IP2 00 0 )相互作用抑制自噬。P 5 3也诱导抑癌基因PTEN,抑制P13K/AKT信号途径,诱导凋亡、抑制癌细胞迁移,故通过诱导或抑制自噬、促进凋亡等途径。

(4)AMPK信号通路:AMPK(AMP-actived protein kinase)——酸腺苷活化蛋白激酶是细胞内能量感受器,在高脂饮食、能量充足的情况下AMPK的活性通常会被抑制,但在限食、低氧以及运动刺激时会被激活。因而也是参与维持细胞能量稳态的重要介质信号分子。AMPK的激活可以通过TSC l/2依赖或非依赖的方式抑制mTORCl/S6K1信号通路的活性。

(5)beclin1(Atg6):它是肿瘤的抑癌基因,在肿瘤发生的早期阶段,一些ATG基因起到了抑癌基因的作用。然而,一旦肿瘤发生,氧化应激和肿瘤微环境激活自噬发挥促进肿瘤细胞生存。

2 自噬对肿瘤的两面性

自噬虽是一个降解/再循环系统,但在有疾病存在的情况下自噬有利有弊,它是一把双刃剑,自噬可促进一些受损的细胞降解但它也为细胞提供养料促进其生长。在存在疾病的病理情况下自噬的活性提高有可能会对身体带来危害,自噬在生物体发育、对抗衰老、神经退行性病变、疾病感染等方面都有其生理意义。

2.1 自噬对肿瘤的促进作用

在各种生理和病理的影响下,人体细胞内受损的细胞器、胞质蛋白等物质引起活性氧自由基(ROS)的增多,对DNA等基因造成损伤,DNA损伤又会影响染色体的稳定性,从而诱发肿瘤的发生。在这种情况下肿瘤细胞可通过自噬降解自身受损的细胞器来维持生存和细胞稳态,自噬在其中扮演“保护者”的作用。癌细胞在中期和晚期繁殖逐渐迅速,大量的复制需要更多的养料以供肿瘤细胞的增殖需要。自噬在此阶段就会起到促进作用,其降解的产物又会成为癌细胞繁殖的原料,自噬对癌细胞的另一个好处就是可增强癌细胞对化疗、放疗及其他疗法的耐受性,在化疗或放疗术后,机体中会有大量受损的'癌细胞(细胞器、蛋白质)等物质,而在此时提高机体自噬活性可及时清除这些有害物质,并为机体健康提供代谢物和能量,为修复受损的细胞器赢得时间和条件,从而保护肿瘤细胞赢得时间和条件,免于发生凋亡性细胞死亡,以维持癌细胞持续增殖。在抗癌药Bortezomib诱导的乳腺癌M C F - 7细胞死亡时, 自噬活性的增高使M C F - 7细胞对Bortezomib产生耐药性。雷帕霉素靶位(TOR)激酶,它是一种丝氨酸苏氨酸激酶,在哺乳动物中为mTOR,TOR/mTOR是细胞内氨基酸、ATP和激素的感受器,可感受胞内氨基酸和ATP的数量,抑制自噬的发生。

2.2 自噬对肿瘤的抑制作用

在肿瘤细胞发生的早期,由于在各种生理、病理情况下细胞中会有一些受损的细胞器、促癌蛋白p62/SQSTM、活性氧(ROS)等有害物质的聚集,久而久之会引发细胞DNA损伤突变导致肿瘤的发生。这时候提高自噬活性是抑制肿瘤发生的最好时机。因此自噬被认为是一种抑制细胞癌变的重要机制[9]。Beclin1是自噬重要的相关蛋白基因,自噬在抑制肿瘤的发生中起着重要作用。研究发现,Beclin1在多种肿瘤中,如人乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等通常是单等位基因缺失。且缺失的Beclin1单等位基因突变小鼠易自发肿瘤。转染beclin1的MCF-7细胞中,自噬活性增强,细胞生长、克隆形成及乳腺肿瘤形成受抑制。此自噬相关蛋白缺失会引发肿瘤,因为他是肿瘤的抑制基因。

3 运动与自噬

mTOR和Beclinl作为各种调控通路的汇集点发挥了至关重要的作用。通过不同的运动方式、运动时间可有效地调节肿瘤的发生发展。常规来说,适宜强度的运动训练可提高机体细胞的自噬水平,继而降解由于运动刺激所带来的衰老的细胞器、合成或折叠错误的蛋白质等有害物质,使其为肌纤维的再生提供充足的养料,还可抑制机体细胞的凋亡和死亡。张昊等研究发现持续6周的有氧运动训练,大鼠心肌Beclinl和At95表达增加,LC3I向LC3Ⅱ转换增加,透射电镜下观察到具有双层膜结构的自噬体形成明显增多。由此可见,通过运动可上调自噬水平,提高细胞中Beclin1基因蛋白水平。

4 结语

运动训练作为一种特殊的干预方式,可能通过增强自噬水平提高细胞中单等位基因Beclie1,从而降低肿瘤的发生。但目前体育科学与运动医学领域内有关运动、自噬与肿瘤的研究还较少,还有很多生物学机制尚不清晰。那么是否可以通过运动提高自噬活性来抑制肿瘤,是否在肿瘤发生的早期可通过运动来抑制癌细胞的发展,在肿瘤的中期和晚期抑制自噬以防止为肿瘤细胞提供养料是否对癌症的治疗与预防有其明显效果,运动、自噬与肿瘤之间是否通过运动提高自噬活性来作用于肿瘤有待进一步研究,在肿瘤的整个发生发展阶段什么时候应该运动可以有益于癌症的治疗,相信这些问题的解决将有助于人们更加充分地认识运动状态下,自噬与肿瘤之间的生物学关系,并为以后运动训练的方法和癌症治疗提供一个理论上的依据。

篇6：试析对黄自作品研究的初探论文

试析对黄自作品研究的初探论文

论文关键词:黄自(1904-1938) 美学思想 创作技法 音乐理论 音乐创作 批判

论文摘要:黄自作为我国近现代音乐史上一位卓有成就的作曲家、音乐理论家和音乐教育家，他把中国的民族音乐和西洋音乐结合在一起，本文笔者时已有的研究成果进行收集、整理和初步梳理，从各方面对现有的文章做分类总结和表述，并提出自己的见解。

黄自是近现代音乐史值得研究的典型人物，他不仅涉及当时的音乐活动、音乐创作、音乐表演、音乐实践，事实上他还是20世纪中国音乐史上土要的研究内容，并且学者们也已经对他进行较多的研究。本人对己有的研究成架进行收集、整理和初步梳理，从《音乐艺术》、《中央音乐学院学报》、《交响》、《音乐研究》、《中国音乐》、《人民音乐》、《钱仁康音乐文选》、《黄钟》这些期刊收集到相关的儿十篇文章，并发现前人研究主要涉及到以下儿个方面:黄自美学思想，器乐作品创作，音乐理论研究，声乐作品(以艺术歌曲为主)创作，50年代对黄自的批判口相关情况分述如下:

黄自的音乐美学思想

黄自在他短短的一生中所写的理论著作并不多，留下的作品也不算多，但在这些为数不多的文章里，黄白提出了不少有关音乐方面的美学思想。

一、创作发展的三阶段看其美学思想。

1黄自还未跳出欧洲传统的束缚。

2.转向对本民主的民族性、时代性和功利性的追求。

二、把理论与实践联系起来石美学思想。

虽说黄自的文章中有出现虚假判断，但我们必须把起理论的漏洞与黄自实际上的美学思想加以区别，前者只是由于理论不完善造成的失误，后者才是他在行动中表现出来的美学追求、审美常识。他的美学思想应当主要通过乐创作，并在实践中表现出来的美学观点。代表其思想本质，而理论上的概括并没有反映其思想本质。

以上对黄自美学思想的阐述可以得出，评价黄自的美学思想一定要立足全面，这是为了避免片面性。一个人在不断地变化存在，不能把一时一事作为判断他的思想依据，也不能笼统而统之或对不同阶段不加区别，因此我们必须依据黄自美学思想的全面不足，经过分析、归纳、比较，抓住共好的一看到不足的一面并吸取经验做出正确的美学思想。

黄自的器乐作品及创作技法

黄自的交响音乐作品只写了《怀旧》和《都是风光幻想曲》两首。并且他对复调音乐的写作也颇见功力。他不仅在掌握西方传统和声的同时，还在和声民族化的探索方面形成自己独特的特色，并给后来的音乐创作产生厂很深远的影响。从笔者搜集的资料总结归纳以下几点创作手法:

一、和声方面。

(一)和声手法与音乐形象的塑造。

1.调性选择与调性布局科学运用。

2.和弦结构。自然大小调、和声大小调的所有和弦，包括极不和谐的和弦运用多颇具特色。

3.和声进行和终止。不仅运用典型的功能性和声进行与终止式，还用富有特色和声进行与终式，在塑造音乐形象方面也发挥了显著作用。

4变和弦的运用。常用重属变和弦、副属和弦与属变和弦。

5和弦外音的运用

6.持续音的运用。

倚音运用较常见口

常用上、属持续音或主属双重持续音来加强和声的功能。

(二)对和声民族化的探索。

在五调式和具有一些五声性音调的自然火小调作品中有出色的运用。

1和弦结构。

2用附加音和弦、四五度叠置和弦，以四度倚音代替三度音的和弦，省略三音的空五度和弦。

3和声进行与转调手法口在作品中注意声部进行的五声部，尤其是在底音部进行的五声化。

4对位化和声口在其.声调式的作品中，他注意对位化声部进行的五声风格，使和声在纵横两方面保持一致。

5.复合调式与混合调式的运用。

6.题材方面口涉及广泛，有管弦乐乐曲，清唱剧等多种题材的音乐作品，并在这些创作领域中形成自己的特色。

黄自的音乐理论研究

黄自在理论和著述方面，以音乐史、音乐欣赏与和声为主口他在回国初就写了《勃拉姆斯》和《西洋音乐进化史的鸟瞰》两书。其中《和声学》是黄自大量分析近代作曲家的作品，比较研究诸家的和声著作，并去初留精、博采众长，从创作实践中总结出实用的和声旋律写成的.。但是他所写的都是18-19世纪的旧时代音乐，并目.书中并没有专门论述民族调试的和声，那为什么只以欧洲传统音乐理论为卞介绍给囚人?可以总结出以下3方面的原因:

1,黄自带回来西洋18-19世纪的旧时代音乐是因为他认识到中国当代,r.乐教育现状的落后。

2、从他卞观原因来看，他接受的卞要是西方传统作曲理论与音乐美学观念的教育与影响，所以他的作品以及归国内的介绍不排除其音乐审美趣味的影响。

3、任何一位作曲家的作品、审美都与其所在环境和历史条件相制约，黄自也不例外。

黄自的一些理论在当时那样的环境中由十局势和政治问题收到了一定的批判，继而对他的一些有价值的艺术关点和创作方式也进行反驳，但在80年代都给予了正确的评价和肯定。

黄自的歌曲创作

黄自的音乐创作以歌曲为主，多数歌曲作品采用韦翰章所作的歌词，其中较为重要的作品都创作于1931-1937年间。“九一八”事变和“一二八”事变发生后，黄自积极参加抗日救亡运动，并在爱国热情的激发下写了《抗敌歌》、《旗正飘飘》、《睡狮》等歌曲。其中《抗日歌》表现出一呼百应的抗日要求，《旗正飘飘》表现悲壮激昂的爱国爱情，两者都用雄壮的进行曲节奏，以主调为主并灵活运用复调技巧的声调写作.以及层次分明、浑然一体的曲式结构，这些都是显示出蓬勃的气势和排山倒海的力量。这两首作品不仅是黄自的代表作，也属于“五四”以来优秀作品的行列。 黄自的抒情艺术歌曲善于运用精练的音乐语言表现诗的意境.内容和形式都和是个结合得非常妥帖。他生前出版的独唱歌集《春思曲》包括《思乡》、《春思曲》、《玫瑰三愿》，都是黄自抒情歌曲的代表作。前两首情景交融.象色调鲜明的彩绘，而《玫瑰三愿》则直抒胸臆，象一幅素笔勾勒的白描。歌曲篇幅很小，却于典雅，抒情中表露了“我愿那妒我的无情……”的善良愿望。在这首歌曲中.钢琴对旋律只是起衬托作用，而前两首中的某些意境都是由钢琴用造型手法(如春雨潇潇、柳丝轻拂和杜鹃啼声的描绘)与和声手法(如描写“陌头杨柳，分色上帘边”的色彩性转调)表现出来。

黄自艺术歌曲中的旋律与是个语言配合非常紧密，尤其注意旋律和歌词的声调配合，注重旋律在表情达意方面所起的作用，甚至使用字句描绘的手法来强调旋律的表现力。如《春思曲》中用降半音和减七和弦来表现“应是梨窝浅”的“浅”字，《长恨歌》中“六军不发无奈何”中用的升半音和增音程来表现“迢迢蜀道长”的“长”字等许多例子。

黄自的重要歌曲作品还包括取材与白居易同名长诗的清唱剧《长恨歌》，以及为唐宋诗词所写的《花非花》、《娥眉山月歌》、《点绛唇赋登楼》、《南乡子登京口北固亭有怀》等。在1933-1935年之间，黄自还创作了28首学生歌曲，其中为联华公司影片《天伦》所作的《天论歌》曾在青年学生中广泛流传。此外，还有巧首儿童歌曲。

黄自的声乐方面创作形成了自己独特的风格。在语言、旋律、节奏及调性等写作方面良好结合和运用:在和声的思维和使用方面以高超的和声手段突破单一调性结构为主体的局限(包括复合和弦的运用，不协和和弦的独立运用，附属和弦的特殊运用方式);在复调思维及其使用方面都有很高的造诣(包括复调手法的运用和复调题材的运用)。

五十年代时期对黄自的批判

在50年代时期的有关黄自的文章，笔者收集了13篇。在这些文章中笔者总结归纳几个方面。

1、在“审美”方面，这类文章认为黄自的音乐美学上的几个具体问题是彻头彻尾的形式主义美学论点，并认为黄自的美学思想是矛盾的。黄自所强调的个人作用正是他资产阶级唯心主义思想的反映。此类文章认为黄自把音乐的社会作用估计成为一种享受主义的美学功能，脱离实际，将黄自对西欧音乐史上的学术争论和艺术批评都一概加以非科学的庸俗论断。

(a)在现实上义创作的方面，这类文章认为黄自出身和长期受资产阶级教育的影响，没有认清社会发展的方向和民主革命的性质。他并没有以客观主义的态度对待历史题材，如《长恨歌》，是以唐朝明皇不爱江山爱美人来讽刺当时反动政府的“不抵抗主义”。在民族音调的创作方面具有局限性。他很少直接从明间音乐中去吸取最生动、最丰富、最基本的东西.而主要是从一些古曲和古典音乐中去找素材。这就使他作品的民族音调带有宫廷音乐和寺庙音乐的典雅以及世大夫阶级音乐的有限气息，而缺乏民间音乐中明朗活泼、坚强有力的生活气息。

(b)歌曲创作方面，这类文章认为黄自由于是资产阶级出身，艺术思想和创作方法受到限制，不可能把自己的爱国主义思想溶化在广大人民能够理解的音乐语言里，不可能在作品中刻画出人民群众的鲜明形象。因此，他的爱国主义歌曲只能受到专业音乐者和知识分子听众的喜爱、共鸣，而对劳动人民来讲，在思想情感和艺术风格上就还存在着不小的距离。

(c)黄自对与民族音乐风格的认识并不是从长期的学习与革命音乐工作的实践中得到。特别是由于所受的欧美资产阶级音乐教育与工作环境的限制，他还很难摆脱当时盛行在音乐界的盲目崇拜西洋，蔑视祖国音乐遗产的错误观点对他的影响。从以上分述中可以总结出黄自由于家庭出身所受教育及环境给他的影响.也由于他的世界观与资产立场的限制，不仅他的进步有一定的限度，而且他的思想也是有他消极的一面。

总结

笔者从以上这几个方面对建国以来期刊中有关黄自文章进行综述。在其作品中艺术歌曲是他全部创作中特别有艺术价值的部分。他善于用精练的音乐语言表现诗的意境，其音乐语言在内容上和形式上都与诗歌或歌词结合得非常妥帖，旋律好象是从歌词的朗诵中自然流注出来的。而在美学思想方面.他的美学思想深受情感论和反映论的影响，但有未能摆脱形式美学的梗桔，所以他常说音乐的形式和内容是难解难分的同一体。他说的内容与形式合一，实际上是限于标题音乐相对的纯正音乐。在其作品创作方面也颇见功力，复调手法的运用，民族调式的复调写作都做了创造性的探索。在理论研究和著述方面，以音乐史、音乐欣赏和和声学为上。

但是笔者从上述方面发现这些论文较少涉及到对黄自艺术歌曲演唱方面的领域。演绎黄自留下的这些具有较高艺术价值的歌曲，要正确淦释创作者的创作目的及其创作情感，并要对作品的时代背景、创作背景以及歌词领会等诸多方面做详细而周到的了解。这样才能对作曲家的一度创作做出相应的二度创作。

因此，笔者认为要科学、正确地演唱黄自的艺术歌曲不仅仅只需要一个正确、美好的声音，更重要的是掌握作曲家的创作意图，并结合当时社会各方面的诸多因素，当然也要联系现状的因素，这样才能更好地表达歌曲所要表达的意思。笔者发现在这一方面的文章基本上没有涉猎，因此，认为可以在这一不足的领域做出一些有价值的研究。

篇7：黄精对机体衰老分子的抑制作用研究论文

黄精对机体衰老分子的抑制作用研究论文

机体衰老的分子机制包括诸多因素。正常情况下，体内存在的氧化防御系统包括SOD ,GSH-Px 等，对抗氧化应激反应，清除机体内产生的自由基，从而起到抗衰老的作用。因此，SOD的高低可间接反映机体清除氧自由基的能力。免疫器官胸腺和脾脏随着衰老进行而不断萎缩，造成衰老机体免疫功能的低下。

所以使用免疫增强剂抑制胸腺和脾脏的萎缩也是延缓衰老的方法之一。谷氨酸是中枢神经系统内含量最高、分布最广、作用最强的兴奋性神经递质，在学习记忆、神经元的生存以及树突的生长与退化方面具有重要作用[4，5]。

我们的研究发现，D-半乳糖衰老模型小鼠SOD的活性明显下降，表明机体衰老时体内抗氧化防御体系活性降低，清除自由基能力下降，导致体内ROS生成过量。过量的`ROS攻击位于线粒体内膜上的脂类、蛋白质和mtRNA，影响线粒体的功能[6]。线粒体功能受损，必然导致细胞内ATP生成不足，使细胞内Na大量滞留，从而激活神经元突触末梢上Glu摄入载体的反向运载，使Glu大量释放[7]。大量释放的Glu可通过促进Na+ 、C1-、水的内流以及Ca2+ 超载来发挥神经毒性，引起急性神经元损伤和迟发性神经元损伤，最终出现记忆力下降、认知障碍、思维迟缓等脑老化表现。

黄精属百合科，黄精属。其根块入药[1] 。中医临床上主要用黄精来治疗糖尿病、冠心病、高脂血症、肺结核、淋巴结核、白细胞减少、腹泻、便秘、失眠等多种病症[2] 。泰山黄精为鸡头黄精，是泰山四大名药之一，多生于阴坡的石壁、杂草丛中和树下，有滋阴润肺、补脾益气、止喘消咳等功效。

本研究发现，泰山黄精较对照黄精能明显提高衰老模型小鼠中的胸腺指数和脾脏指数，来提高衰老小鼠免疫功能；泰山黄精能明显的提高衰老模型小鼠中的SOD含量，通过清除衰老模型小树体内的自由基来延缓衰老；另一方面，泰山黄精能明显降低衰老模型小鼠中的谷氨酸含量，从而抑制衰老时Glu的异常释放，减轻Glu的神经毒性作用，从而改善神经元的功能。因而，泰山黄精可以从多种机制来达到延缓衰老的目的。这将为泰山黄精的抗衰老临床应用和保健品的开发奠定试验基础。

篇8：化学吸附自组装偶氮苯小分子单层膜及表面浸润性研究

化学吸附自组装偶氮苯小分子单层膜及表面浸润性研究

通过化学吸附自组装的方法,将小分子量的偶氮苯分子自组装到平滑硅基底表面,其表面接触角为83.7°.微结构化硅基底表面的偶氮苯单层膜上表现出超疏水的`特性,接触角达到了151.9°.经过紫外光照射后,该表面的接触角没有发生明显的降低.

作 者：姜武辉 金美花 王国杰 江雷 Jiang,Wuhui Jin,Meihua Wang,Guojie Jiang,Lei  作者单位：姜武辉,Jiang,Wuhui(大连海事大学材料科学与工程系,大连,116026;大连市环境技术开发中心技术部,大连,116001)

金美花,Jin,Meihua(大连海事大学材料科学与工程系,大连,116026)

王国杰,江雷,Wang,Guojie,Jiang,Lei(中国科学院化学研究所分子科学中心,北京,100080)

刊 名：化学学报  ISTIC SCI PKU英文刊名：ACTA CHIMICA SINICA 年，卷(期)： 67(13) 分类号：O6 关键词：自组装   偶氮苯   表面浸润性  

篇9：网络时代自媒体新闻的法律边界研究论文

网络时代自媒体新闻的法律边界研究论文

摘要：互联网时代, 自媒体新闻颠覆了人们对传统新闻的认知, 新闻的传播更加便捷, 内容也更加丰富。与此同时, 由于自媒体新闻领域法律法规不够完善, 自媒体新闻信息的真实性、可靠性大大降低, 自媒体新闻领域乱象频生。基于此, 笔者对互联网时代自媒体新闻的法律边界相关问题进行研究。

关键词：互联网; 自媒体新闻; 法律边界;

近年来, 微博、微信、QQ、论坛等网络平台的出现使中国正式进入自媒体时代, 在自媒体平台上, 人人都能成为记者, 轻松对外传播新闻。现阶段, 每当人们遇到街边斗殴、车祸、自然灾害等事件时, 随手拍下一段视频、精心编辑一段文字, 随后上传至网上, 便会在网络上引起较大的反响。得益于自媒体新闻, 如今新闻传播速度越来越快, 内容也越来越丰富, 社会各类事件都得到了广泛的关注。然而, 一些为博眼球、一味追求商业利益的自媒体人开始传播虚假信息、夸大事实真相、对他人进行侮辱或人身攻击, 扰乱了网络秩序、社会公共秩序, 危害了社会公共利益。针对这一现象, 我国正不断完善相关法律法规, 以互联网为依托的自媒体新闻的法律边界开始清晰、明朗起来。

1、自媒体新闻发展现状

“自媒体”, 又称“个人媒体”“公民媒体”, 微博、论坛、博客等网络平台都可以称为自媒体。依托互联网技术, 人们可以在这些网络平台上自由发布文章、评论或新闻信息。在自媒体时代, 新闻传播更加方便, 内容更加丰富, 然而,近年来自媒体新闻的真实性、可信性大大降低, 不少自媒体人一味追求点击率、阅读量等商业利益, 忽视新闻本身应当具备的特质, 自媒体新闻领域乱象频生。2017年6月1日, 《互联网新闻信息服务管理规定》正式施行, 该《规定》指出, 自媒体人必须取得互联网新闻信息服务许可后方可借助互联网平台向社会大众提供新闻信息服务。该《规定》施行不但对现今自媒体新闻领域的乱象进行了整治, 同时也为自媒体新闻报道、评论、转载划出了一道道法律边界。

2、互联网时代自媒体新闻的法律边界

2.1、不得传播虚假信息或夸大事实真相

随着自媒体影响力的持续上升, “标题党”、夸大事实等新的问题也不断出现。2017年, 微博、微信、论坛等自媒体平台上的不少自媒体人发布或转载了一些夸大事实真相的新闻。由于这类新闻信息极易误导民众, 所以该类自媒体新闻现象已经在社会范围内引起了广泛的关注, 《互联网信息服务管理办法》《中华人民共和国网络安全法》都针对这一现象制定了相应的法律规定, 《互联网新闻信息服务管理规定》也为自媒体涉足新闻领域设置了“门槛”, 自媒体新闻也要遵守法律的约束。

2.2、不得严重扰乱网络秩序及社会公共秩序

随着自媒体技术的不断革新, 越来越多的人开始在网络平台上发表文章、评论, 自媒体“大军”不断壮大, 网络成为21世纪最重要的新闻信息传播载体。在这一发展形势下, 自媒体新闻信息的影响力也逐渐增大, 一些自媒体人为博眼球发布恶意新闻, 扰乱了网络秩序、社会公共秩序。如今, 相关法律法规已经将“不得严重扰乱网络秩序及社会公共秩序”作为自媒体新闻的'法律边界之一。

2013年, 网络名人社会责任论坛在央视举行, 在论坛中人们提出了七条网民应当遵守的基本原则, 即“七条底线”, 第一条便是网民们在发表言论时不得触及国家法律法规的底线。这一原则在自媒体新闻领域同样适用, 《互联网信息服务管理办法》第十五条规定中提到互联网信息服务提供者必须遵循“九不准”原则。“七底线”“九不准”的制定从根本上还是为了维护网络秩序和社会公共秩序, 从而保证众多网民能够正常享受网络服务。

2.3、不得侵害他人合法权益

我国宪法规定, 中华人民共和国公民在行使自由权利时不得损害其他公民的合法权益。在自媒体平台上, 每个人都有机会成为新闻的传播者, 然而在传播新闻信息时, 自媒体人不可损害他人的合法权益。近年来“人肉事件”频频发生, 我们不得不承认, 网络人肉本质上侵犯了他人的合法权益。由于互联网的迅速发展, 我国有关法律法规还存在着一些漏洞, 随着法律法规的不断完善, 这一事件的法律边界也将更加明确。

2.4、不得危及社会公共利益

从探析互联网时代自媒体新闻的法律边界这一角度来看, 社会公共利益主要可以分为两个方面, 一是国家安全利益, 二是司法公正利益, 即自媒体新闻的发布、转载、评论不可以危害国家安全利益和司法公正利益。

在信息爆炸时代, 自媒体新闻改变了人们对传统新闻的看法。然而, 自媒体新闻缺少传统新闻多方审核的过程, 传播内容极易对社会公共利益造成影响。福建军区某一干部在自媒体平台上发布日常的训练照片, 暴露了军区营区地名、位置、地标, 给国家安全带来安全威胁。因此, 自媒体人在发表新闻信息时应注意保护国家政治、文化、国防、科技、社会安全信息, 避免相关信息泄露, 为保护国家安全贡献出自己的力量。

2017年, 有关互联网新闻信息服务管理、网络安全的法律法规不断出台, 我国正不断填补因互联网飞速发展而出现的法律法规的漏洞, 自媒体新闻的法律边界逐渐明确。然而, 明确自媒体新闻的法律边界并不是为了限制自媒体新闻的发展, 而是为了保护自媒体人的合法权益、维护自媒体新闻领域的网络秩序。明确自媒体新闻的法律边界的核心目的是为其良性发展保驾护航, 从而让自媒体新闻在更加有序的环境中茁壮成长。

参考文献

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[3]吴存鹏.浅析自媒体的法律规制[J].法制博览, 2017 (5) .

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