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篇1：脉胞菌hH3v基因的初步研究及原核表达载体构建
脉胞菌hH3v基因的初步研究及原核表达载体构建
根据植物表达栽体pET52(b)多克隆住点和脉胞菌着丝粒结构相关蛋白CenH3的`编码基因hH3v序列,设计引物,通过PCR扩增将基因两端加上KpnⅠ和SacⅠ酶切住点,经双醇切后将hH3v插入表达载体pET52(b)中,利用热激法转化大肠杆菌Top10感受态细胞,在选择培养基上挑取单菌落培养,经PCR检测,表明目的基因原核表达载体构建成功,为着丝粒结构进一步的研究提供了基础.
作 者：王} 作者单位：牡丹江师范学院生物系,黑龙江,牡丹江,157012 刊 名：牡丹江师范学院学报（自然科学版） 英文刊名：JOURNAL OF MUDANJING NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES EDITION) 年，卷(期)： “”(4) 分类号：Q74 关键词：脉胞菌 hH3v 表达载体 PCR篇2：人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
目的: 构建人CIDE-3基因的原核表达载体, 并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法: 提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA, 经RT-PCR扩增人CIDE-3基因片段, 并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中, 构建重组质粒pET28a(+)-CIDE-3.经限制性内切酶BamH I、Xho I双酶切鉴定及序列测定后, 转化E.coli BL21(DE3), 经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.结果: 获得全长为516 bp的人CIDE-3基因片段.以构建的重组质粒pET28a(+)-CIDE-3转化E.coli BL21(DE3)后, 经IPTG诱导, 表达出相对分子质量(Mr)约为23 000的重组CIDE-3蛋白.SDS-PAGE分析显示, 表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的'胞质中, 表达量约占全菌蛋白的32%.结论: 成功地构建了原核表达载体pET28a(+)-CIDE-3, 并表达出重组CIDE-3蛋白, 为进一步多克隆抗体的制备和凋亡的相关研究奠定了实验基础.
作 者：姚丽 李青 李蓬 张静 叶菁 陈广生 王淑芳 YAO Li LI Qing LI Peng ZHANG Jing YE Jing CHEN Guang-sheng WANG Shu-fang 作者单位：姚丽,李青,张静,叶菁,陈广生,王淑芳,YAO Li,LI Qing,ZHANG Jing,YE Jing,CHEN Guang-sheng,WANG Shu-fang(第四军医大学西京医院病理科,陕西,西安,710032)李蓬,LI Peng(香港科技大学生物系,香港)
刊 名：细胞与分子免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY 年，卷(期)： 22(2) 分类号：Q786 关键词：CIDE-3 基因克隆 原核表达篇3：人细胞周期蛋白G2基因真核表达载体构建及其功能研究
人细胞周期蛋白G2基因真核表达载体构建及其功能研究
构建人cyclin G2基因真核表达载体,进一步研究cyclin G2对体外培养细胞增殖的调节作用及可能的.调节机制.以人口腔癌前上皮细胞系POE4总RNA的反转录产物为模板,应用RT-PCR方法克隆cyclin G2基因cDNA,成功构建了真核表达载体pIRES-G2.应用脂质体介导的基因转染技术,以体外培养的肿瘤细胞系HeLa细胞和正常细胞系CV-1细胞作为受体细胞,进行转基因表达研究,发现cyclin G2高表达对体外培养细胞的增殖起明显抑制作用.应用p16INK4a、p21WAF1、p27KIP1三种周期蛋白依赖性激酶抑制因子的单克隆抗体对转基因的HeLa细胞进行免疫细胞化学研究,发现转染pIRES-G2的实验组细胞中,p21WAF1蛋白染色阳性细胞数明显多于转染空载体的对照组,平均光密度值高于对照组,两组间均有显著性差异(p＜0.01),提示cyclin G2抑制细胞增殖作用可能是通过诱导p21WAF1的表达而实现.
作 者：田玉楼 刘洁 张学 TIAN Yu-lou LIU Jie ZHANG Xue 作者单位：田玉楼,TIAN Yu-lou(中国医科大学口腔医学院,沈阳,110002)刘洁,LIU Jie(中国医科大学实验技术中心,沈阳,110001)
张学,ZHANG Xue(中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室,沈阳,110001)
刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 26(6) 分类号：Q789 关键词：细胞周期蛋白G2 细胞增殖 p21WAF1
