下面是小编整理的大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定，本文共5篇，欢迎大家阅读借鉴，并有积极分享。本文原稿由网友“nancy8867”提供。
篇1：大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定
大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定
目的:构建靶向大鼠CD40基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体.方法:利用Ambion公司的网上设计工具,设计2个靶向CD40基因的发夹状siRNA,通过化学合成的方法合成2对分别互补的寡核苷酸链,退火后将双链DNA片段连接至pSilencer4.1-CMV neo vector的.多克隆位点,转化扩增提取质粒,对重组质粒进行BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定.结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与pSilencer4.1-CMV neo vector连接正确,靶向大鼠CD40基因的siRNA重组表达质粒构建成功.结论:成功构建了大鼠CD40基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer4.1-CMV-CD40.1和pSilencer4.1-CMV-CD40.2,为进一步研究CD40基因在同种器官移植排斥反应中的作用奠定基础.
作 者：王楠 马庆久 鲁建国 何显力 邹爱民 李坤 WANG Nan MA Qing-jiu LU Jian-guo HE Xian-li ZOU Ai-min LI Kun 作者单位：王楠,马庆久,鲁建国,何显力,WANG Nan,MA Qing-jiu,LU Jian-guo,HE Xian-li(第四军医大学唐都医院普通外科,陕西西安,710038)邹爱民,李坤,ZOU Ai-min,LI Kun(第四军医大学唐都医院中心实验室,陕西西安,710038)
刊 名：医学研究生学报 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATES 年，卷(期)： 21(3) 分类号：Q782 关键词：RNA干扰 CD40 重组载体篇2：靶向Nrf2基因RNA干扰真核表达载体的构建
靶向Nrf2基因RNA干扰真核表达载体的构建
目的:利用pSUPER载体构建针对人核因子E2 p45相关因子2(Nrf2)基因的RNA干扰真核表达载体,为研究Nrf2基因在结肠癌化学预防中的作用奠定实验基础.方法:设计特异性针对Nrf2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列,构建重组载体pSUPER-Nrf2转染人结肠癌HT-29细胞.同时转染pEGFP-N1质粒,通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光监测转染效率,共转染pEGFP-N1 48h后G418筛选稳定表达的细胞.RT-PCR和Western blot检测瞬时及稳定转染细胞Nrf2基因的表达,观察稳定筛选出的细胞中UGT1A基因mRNA水平的表达变化.结果:成功构建RNA干扰真核表达载体pSU-PER-Nrf2.转染后24～96 h,荧光显微镜及FCM检测显示转染效率为30%～75%.瞬时转染pSUPER-Nff2-A2,pSUPER-Nrf2-B2重组质粒Nrf2 mRNA的.表达差异无显著性(P＞0.05);瞬时转染72 h及稳定转染后,pSUPER-Nrf2-A1,pSUPER-Nrf2-B1可显著抑制Nrf2基因的表达.RT-PCR检测显示,稳定筛选出的细胞中UGT1A表达水平降低(P＜0.05).结论:成功构建了Nrf2的RNA干扰表达载体,筛选并获得低表达Nrf2基因的稳定克隆,筛选出的细胞UGT1A表达水平明显降低,表明Nrf2可能对UGT1A酶的表达具有调节作用.
作 者：杨晓云 李延青 梁晓红 郭玉婷 袁俊华 张燕 朱强 YANG Xiao-yun LI Yan-qing LIANG Xiao-hong GUO Yu-ting YUAN Jun-hua ZHANG Yan ZHU Qiang 作者单位：杨晓云,李延青,郭玉婷,袁俊华,张燕,朱强,YANG Xiao-yun,LI Yan-qing,GUO Yu-ting,YUAN Jun-hua,ZHANG Yan,ZHU Qiang(山东大学,齐鲁医院消化内科,山东,济南,250012)梁晓红,LIANG Xiao-hong(山东大学,免疫学研究所,山东,济南,250012)
刊 名：山东大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES) 年，卷(期)： 44(4) 分类号：Q786 关键词：基因,Nrf2 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 RNA干扰 结肠肿瘤篇3：健康人APOBEC3G基因的克隆及真核表达载体的构建与鉴定
健康人APOBEC3G基因的克隆及真核表达载体的构建与鉴定
目的 克隆人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide 3G,APOBEC3G)基因cDNA,构建APOBEC3G基因的'真核表达载体,并在体外进行表达和鉴定.方法 采用RT-PER技术从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因,将该基因插入pcDNA3.1真核表达载体,构建pcDNA3.1-A3G真核表达质粒,并利用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-A3G转染HepG2和HL7702细胞,经免疫细胞化学、Western blot等方法检测APOBEC3G真核表达情况.结果 双酶切鉴定和测序结果表明,APOBEC3G真核表达载体构建成功.免疫细胞化学和Western blot结果均显示,转染pcDNA3.1-A3G的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白均高表达,转染空质粒pcDNA3.1和未转染的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白低表达或不表达.结论 成功构建了人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G,为进一步研究APOBEC3G抗HBV作用奠定实验基础.
作 者：甘宜敏 孔凡运 史震 汤仁仙 郑葵阳 作者单位：徐州医学院病原生物学教研室,江苏,徐州,221002 刊 名：徐州医学院学报 ISTIC英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU 年，卷(期)： 30(4) 分类号：Q789 R394.2 关键词：APOBEC3G 克隆 真核表达载体篇4：口蹄疫病毒P1+2A基因真核表达载体的构建
口蹄疫病毒P1+2A基因真核表达载体的构建
通过RT-PCR方法获得了口蹄疫病毒O型,编号为OF3毒的P1+2A区的'目的基因,并将其克隆到克隆载体pMD18-T上,再根据表达载体pQE-Trisystem的特性及酶切位点设计合适的表达引物.由表达引物通过PCR技术从克隆载体上扩增出带有特定酶切位点的目的片段,再对载体和目的片段进行酶切处理,处理后由T4 DNA连接酶将二者连接.通过PCR及酶切鉴定,结果证明口蹄疫病毒目的基因片段已被正确克隆到表达载体pQE-Trisystem上.
作 者：龚真莉 刘湘涛 刘磊 尚佑军 尹双辉 田宏 郑海学 陈国栋 GONG Zhen-li LIU Xiang-tao LIU Lei SHANG You-jun YIN Shuang-hui TIAN Hong ZHENG Hai-xue CHEN Guo-dong 作者单位：龚真莉,GONG Zhen-li(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070;中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃,兰州,730046)刘湘涛,尚佑军,尹双辉,田宏,郑海学,陈国栋,LIU Xiang-tao,SHANG You-jun,YIN Shuang-hui,TIAN Hong,ZHENG Hai-xue,CHEN Guo-dong(中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃,兰州,730046)
刘磊,LIU Lei(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070)
刊 名：甘肃农业大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 41(1) 分类号：Q785 关键词：口蹄疫病毒 P1+2A基因 pQE-Trisystem篇5：小鼠睫状神经营养因子基因的克隆及真核表达载体的构建
小鼠睫状神经营养因子基因的克隆及真核表达载体的构建
目的:分别构建野生型和截短型小鼠睫状神经营养因子(CNTF)基因的真核表达载体.方法:通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增小鼠CNTF野生型全长编码序列,体外定点突变获取截短型CNTF的互补DNA(cDNA)编码序列,将上述两序列分别克隆至pGEM-TEasy载体,经限制性内切酶EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后,将野生型和截短型CNTF基因连入pTracer-CMV真核表达载体,DNA测序鉴定.结果:PCR成功扩增了野生型和截短型CNTF基因,DNA序列分析证实两种真核表达载体中的`CNTF序列与Gene Bank中目的序列一致.结论:野生型和截短型CNTF基因真核表达载体的成功构建为视网膜色素变性(RP)的基因治疗研究奠定了基础.
作 者：袁松涛 左爱军 李宁东 梁东春 赵堪兴 YUAN Songtao ZUO Aijun LI Ningdong LIANG Dongchun ZHAO Kanxing 作者单位：袁松涛,YUAN Songtao(300070,天津医科大学;天津市眼科医院)左爱军,梁东春,ZUO Aijun,LIANG Dongchun(天津市内分泌研究所)
李宁东,LI Ningdong(天津市眼科医院)
赵堪兴,ZHAO Kanxing(300070,天津医科大学)
刊 名：天津医药 ISTIC PKU英文刊名：TIANJIN MEDICAL JOURNAL 年，卷(期)：2006 34(7) 分类号：Q3 关键词：睫状神经营养因子 基因克隆 真核表达载体 视网膜色素变性 小鼠
