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篇1：人参皂苷对体外培养的缺氧海马神经元的预防保护作用
人参皂苷对体外培养的缺氧海马神经元的预防保护作用
取新生Wistar大鼠海马神经元体外培养14d,随机分为对照组、尼莫地平5μmol/L组、人参皂苷Rg20.025mmol/L组、Rg20.05mmol/L组.将药物加入到培养液中4h后,连续冲以95%N2+95%CO2混合气体,建立急性缺氧细胞模型.台盼蓝染色细胞计数,吉姆萨染色观察细胞形态并计算其凋亡率,DNA Ladder测定细胞凋亡程度.结果提示,人参皂苷Rg2可显著降低体外培养大鼠缺氧海马神经元的细胞凋亡率而发挥对其保护作用.
作 者：李安庆 王双燕 王守彪 沈若武 作者单位：李安庆(淄博市临淄区人民医院,山东,淄博,255400)王双燕,王守彪,沈若武(青岛大学医学院)
刊 名：山东医药 ISTIC PKU英文刊名：SHANDONG MEDICAL JOURNAL 年，卷(期)： 46(7) 分类号：Q421 关键词：人参皂苷Rg2 缺氧 海马神经元 DNA Ladder篇2：人参皂苷Rg1对多巴胺能神经元的保护作用及ICI182,780的阻断作用
人参皂苷Rg1对多巴胺能神经元的保护作用及ICI182,780的阻断作用
目的 研究人参皂苷Rg1对去卵巢(ovariectomized,OVX)帕金森病(Parkinson disease,PD)模型大鼠黑质(substantia nigra,SN)酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达的影响以及ICI182,780的阻断作用.方法 雌性Wistar大鼠随机分为正常组、OVX组、6-hydroxydopamine(6-OHDA)组、Rg1+6-OHDA组及ICI+Rg1+6-OHDA组.大鼠OVX后应用6-OHDA单侧损毁内侧前脑束(medial forebrain bundle,MFB)制备PD模型,腹腔注射Rg1或侧脑室同时给予雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI182,780,免疫组织化学技术检测TH阳性神经元,RT-PCR技术检测SN内TH基因的.表达.结果 OVX大鼠SN内TH基因的表达较正常大鼠明显降低(P＜0.05).6-OHDA制备的PD模型组损毁侧SN内TH阳性神经元数量及TH基因表达较健侧明显降低(P＜0.01).与模型组相比,Rg1可显著提高损毁侧大鼠SN内TH阳性神经元数量及TH基因的表达(P＜0.01).此效应可以被ER拮抗剂ICI182,780完全阻断(P＜0.01).结论 ER拮抗剂ICI182,780可以阻断人参皂苷Rg1对OVX PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用.
作 者：徐丽 张敏 陈文芳 XU Li ZHANG Min CHEN Wen-fang 作者单位：青岛大学医学院生理教研室,青岛,266071 刊 名：山西医科大学学报 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 38(8) 分类号：Q426 R592 关键词：帕金森病 人参皂苷Rg1 多巴胺 黑质 雌激素受体 大鼠篇3：玉米须皂苷对糖尿病小鼠降糖作用研究
玉米须皂苷对糖尿病小鼠降糖作用研究
玉米须为禾本科植物玉蜀黍Zea may L.的干燥花柱和柱头, 具有利水消肿、利湿退黄之功, 主要含挥发性生物碱、黄酮、尿囊素、肌醇、甾醇、多糖等成分[1].
作 者：俞利平亢晓冬 尹洪萍 袁红 作者单位：杭州师范大学医学动物中心,浙江杭州,310018 刊 名：中兽医医药杂志 英文刊名：JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE VETERINARY MEDICINE 年，卷(期)： 28(3) 分类号：S853.74 关键词：篇4：深究DP2干预对大鼠海马神经元的作用论文
深究DP2干预对大鼠海马神经元的作用论文
铝为地壳中含量最丰富的金属元素，人类日常生活中应用广泛，主要通过食物、化妆品及建筑材料等途径摄入。经证实，长期摄入大剂量铝会产生严重中枢神经系统毒性，表现为行为和认知功能障碍、神经元损伤，甚至神经退行性变，但其具体机制尚不完全清楚。前列腺素(PGs)是一类多不饱和脂肪酸衍生物，由环氧化酶(COX)催化花生四烯酸(AA)代谢产生，介导一系列生理病理过程。前列腺素D2(PGD2)是大脑中最丰富的PGs，其合酶(PGDS)有脑型PGDS(L睵GDS)和生血型PGDS(H睵GDS)两种亚型。在中枢神经系统，除少突胶质细胞外，L睵GDS高表达于神经元。PGD2与特异性受体DP1和DP2结合后，通过受体介导的信号传递机制而发挥广泛作用。DP1和DP2都是G蛋白偶联受体，分别偶联Gs和Gi蛋白，影响环磷酸腺苷(cAMP)水平而发挥不同作用。有研究报道，在PGD2 致原代大鼠皮层神经元损伤模型中，DP2 拮抗剂BAY瞮3405未发挥保护作用，推测DP2 可能不介导PGD2 的神经毒性。另也有研究报道，在谷氨酸致原代大鼠海马脑片损伤模型中，DP2激动剂DK睵GD2明显升高神经元的LDH漏出率及细胞死亡率，提示DP2介导PGD2的神经毒性。出现此矛盾结果，可能与研究模型不同有关。DP2作为DP受体中的一员，在铝盐致原代培养大鼠海马神经元损伤过程中具体是如何变化的，尚未见报道。目前广泛研究的DP2选择性激动剂主要有DK睵GD2、15d睵GD2、15d睵GJ2，DP2 选择性拮抗剂主要有CAY10471、AM461、AZD1981。参考Yue等的报道，我们选择DK睵GD2、CAY10471作为干预药物进行实验。我们前期实验结果表明，铝负荷原代培养大鼠海马神经元损伤模型中，L睵GDS表达明显上调，DP2表达明显下调，PGD2 含量明显升高，初步提示L睵GDS睵GD2睤P2信号通路可能参与了神经元损伤过程。在本实验中，我们采用DP2选择性激动剂和拮抗剂分别干预铝负荷神经元，进一步观察DP2在原代培养大鼠海马神经元中的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 选取孕期18d左右的SD大鼠，由重庆医科大学实验动物中心提供，合格证书号：SCXK(渝)-0002。
1.1.2 主要试剂与仪器 麦芽酚(阿拉丁，上海)，DMEM/F12、D睭ank′s(Hyclone，美国)，B27、Neuro瞓asal培养基、胎牛血清(Gibco，美国)，左旋多聚赖氨酸、MTT试剂盒(Sigma，美国)，青霉素-链霉素溶液、LDH试剂盒、Fluo3AM(碧云天，上海)，山羊抗兔特异性烯醇化酶(NSE)多克隆抗体(博士德，武汉)，SP试剂盒、DAB显色剂(中杉金桥，北京)，苏木精染液、伊红染液(南京建成，南京)，DK睵GD2、CAY10471(Cayman，美国)，超净工作台(苏州净化设备有限公司)，二氧化碳培养箱(ThermoSci瞖ntific，美国)，超纯水系统(Millipore，美国)，低温冷冻离心机(ThermoScientific，美国)，激光扫描共聚焦显微镜(Bio睷ad，美国)，全自动酶标仪(BioTek，美国)。
1.2 方法
1.2.1 大鼠海马神经元原代培养 取孕期18d左右的SD大鼠，断颈后迅速剪开腹部皮肤和腹膜，将子宫完全暴露后剪断肌层和脐带，取出胎鼠并立即浸泡于装有75%乙醇的烧杯中。约30s后，将消毒好的胎鼠移入事先准备的D睭anks液中，断头取脑，迅速分离出两侧完整海马，放入冰浴的D睭anks液中，用眼科剪将海马组织剪碎。加入组织体积5倍左右的0125%胰酶，混匀，37℃培养箱内消化，10min时拿出轻轻吹打数次。20min后，加入同体积的含10%胎牛血清培养液终止消化。200目细胞网筛过滤，收集细胞悬液，800r·min-1离心10min。弃去上清，加入一定量的含10%胎牛血清培养液重悬细胞，制成细胞密度为1×106·L-1的细胞悬液。吸取不同体积细胞悬液分别接种于左旋多聚赖氨酸包被好的培养板、培养皿及培养瓶中，置于37℃、5% CO2的培养箱中培养。4h后，待神经元贴壁，换含2% B27的Neurobasal培养液继续培养，以后每隔3d半量换液1次。海马神经元培养至d7时长到较好状态，可进行后续实验。
1.2.2 原代培养大鼠海马神经元的免疫化学鉴定 取6孔培养板中培养至d7的海马神经元爬片(10mm×10mm)，弃去细胞培养液用PBS漂洗3次;4%多聚甲醛固定30min，PBS漂洗3次，每次2min;3% H2O2 孵育15min，PBS漂洗3次，每次2min;10%山羊血清封闭，37℃孵育20min，吸干血清，不漂洗;NSE多克隆抗体∶抗体稀释液(1∶50)，以PBS代替一抗设空白对照，4℃孵育过夜，PBS漂洗3次，每次5min;生物素标记山羊抗兔二抗，37℃孵育30min，PBS漂洗3次，每次5min;辣根酶标记链霉素卵蛋白素工作液，37℃ 孵育30min，PBS漂洗3次，每次5min;避光条件下，DAB显色10min，自来水终止反应;苏木精染液复染细胞核，3min后自来水返蓝;95%乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片;晾干，镜下观察。
1.2.3 MTT测定 将96孔培养板中大鼠海马神经元培养至d7进行实验分组，即空白对照组(300μmol·L-1maltol)、铝负荷模型组[100μmol·L-1Al(malt)3]、干预组(Al3+ +10-5、3×10-6、10-6mol·L-1 DK睵GD2、CAY10471)。在加入处理因素后继续培养24h，每孔加入20μL的MTT溶液(5g·L-1)，37℃培养箱中孵育4h。弃去孔内上清液，加入150μLDMSO，摇床上避光震荡，以充分溶解结晶物，于570nm波长处测定吸光度值(OD值)。
1.2.4 乳酸脱氢酶(LDH)漏出率测定 将24孔培养板中大鼠海马神经元培养至d7进行实验药物处理(分组同“1.2.3”)，继续培养24h后，根据LDH测定试剂盒说明书具体步骤操作，于490nm波长处测定OD值。计算公式：细胞毒性或LDH漏出率/% =(处理样品OD值-样品对照孔OD值)/(细胞最大酶活性的.OD值-样品对照孔OD值)×100。
1.2.5 海马神经元病理形态学观察 将24孔培养板中大鼠海马神经元爬片(10mm×10mm)培养至d7进行实验分组，即空白对照组(300μmol·L-1mal瞭ol)、铝负荷模型组[100μmol·L-1Al(malt)3]、干预组(Al3+ +10-5mol·L-1DK睵GD2、CAY10471)。在加入处理因素后继续培养24h，弃去细胞培养液，PBS漂洗3次，每次1min;4%多聚甲醛固定30min，PBS漂洗3次;HE染色，镜下观察。
1.2.6 Ca2+荧光强度测定 将共聚焦专用培养皿中大鼠海马神经元培养至d7进行药物处理(分组同“1.2.5”)，继续培养24h。弃去培养皿中培养液，采用Ca2+荧光探针Fluo3/AM标记活细胞内Ca2+，通过激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内Ca2+荧光强度。1.2.7 统计学分析 所有实验结果均以珋x±s表示，采用SPSS17.0统计软件进行分析，组间比较采用单因素方差分析及Dunnett′st检验。
2 结果
2.1 原代培养大鼠海马神经元NSE免疫化学鉴定 培养至d7的神经元，在倒置光学显微镜下观察，其胞体饱满有光晕，轴突和树突明显，突起交错连接成网状。经NSE免疫细胞化学染色后，阳性细胞胞体及突起呈棕黄色;苏木精复染后，阳性细胞胞核呈蓝色。随机取6个视野，每个视野挑选100个细胞，计数NSE阳性细胞并计算其所占百分比。统计结果显示，超过95%为阳性细胞(Fig1)。
2.2 DP2干预对铝负荷原代培养大鼠海马神经元存活力的影响
2.2.1 DK睵GD2对铝负荷原代培养大鼠海马神经元存活力的影响 与空白对照组比较，铝负荷模型组MTT值明显降低(P<001);与铝负荷模型组比较，DK睵GD2干预组MTT值明显降低，且有剂量依赖性。
2.2.2 CAY10471对铝负荷原代培养大鼠海马神经元存活力的影响 与空白对照组比较，铝负荷模型组MTT值明显降低(P<001);与铝负荷模型组比较，CAY10471干预组MTT值明显升高，且有剂量依赖性。
2.3 DP2干预对铝负荷原代培养大鼠海马神经元LDH漏出率的影响
2.3.1 DK睵GD2对铝负荷原代培养大鼠海马神经元LDH漏出率的影响 与空白对照组比较，铝负荷模型组LDH漏出率明显升高(P<001);与铝负荷模型组比较，DK睵GD2 干预组LDH漏出率明显升高，10-5mol·L-1、3×10-6mol·L-1组差异有显著性(P<001。
2.3.2 CAY10471对铝负荷原代培养大鼠海马神经元LDH漏出率的影响 与空白对照组比较，铝负荷模型组LDH漏出率明显升高(P<001);与铝负荷模型组比较，CAY10471干预组LDH漏出率明显降低(P<001)。
2.4 DP2干预对铝负荷原代培养大鼠海马神经元病理形态学的影响 HE染色后，在正置光学显微镜下观察，空白对照组海马神经元结构清晰完整，胞体呈锥形或三角形，核仁明显，有双极或多极突起并相互交织成网;铝负荷模型组海马神经元细胞数目明显减少，突起萎缩，部分细胞核固缩;DK睵GD2干预组海马神经细胞几乎全部核固缩、裂解;CAY10471干预组海马神经元较模型组神经元结构完整，胞体、胞核明显，裂解细胞明显减少(Fig2、3)。
2.5 DP2干预对铝负荷原代培养大鼠海马神经元Ca2+荧光强度变化的影响 空白对照组海马神经元的Ca2+荧光强度极其微弱，铝负荷模型组Ca2+荧光强度明显增强(P<001);与铝负荷模型组比较，DK睵GD2干预组Ca2+荧光强度有增强趋势，但差异无显著性;CAY10471干预组Ca2+荧光强度明显降低(P<001)(Tab5、Fig4)。
3 讨论
铝作为一种公认的神经毒剂，过量蓄积可严重影响人的认知功能，进而诱发一系列神经系统疾病。与三氯化铝、葡萄糖酸铝等其他铝盐相比，麦芽酚铝[Al(malt)3]是一种中性含铝复合物，在生理pH条件能释放出大量Al3+，有利于进行铝负荷神经毒性的相关研究。本实验采用Neurobasal培养基(含2% B27)进行海马神经元的原代培养，通过神经元胞质内特异性标志物NSE的鉴定，其纯度超过95%。参考Chen等[11]并通过我们的前期实验摸索，本实验采用100μmol·L-1麦芽酚铝建立铝负荷大鼠原代海马神经元损伤模型。研究结果发现，与空白对照组比较，铝负荷原代培养大鼠海马神经元MTT值明显降低、LDH漏出率明显升高、Ca2+荧光强度明显增强，海马神经细胞数目明显减少、突起萎缩，部分细胞核固缩。Chen等[12]对麦芽酚铝致原代培养的大鼠皮层神经元损伤进行了研究，发现Al3+通过激活Rho睷ock信号通路诱导神经毒性。Johnson等[13]在原代培养的大鼠海马神经元中发现，麦芽酚铝可造成神经元呈时间和剂量依赖性凋亡，其作用机制可能与麦芽酚铝抑制脑源性神经生长因子(BDNF)，导致细胞内Ca2+升高有关。
我们实验结果还发现，与铝负荷模型组相比，DK睵GD2干预组MTT值明显降低、LDH漏出率明显升高、Ca2+荧光强度有增强趋势，海马神经细胞几乎全部核固缩、裂解;CAY10471干预组MTT值明显升高、LDH漏出率明显降低、Ca2+荧光强度明显减弱，海马神经元较模型组神经元结构完整，胞体、胞核明显，裂解细胞明显减少。有研究报道，DP2 偶联Gi蛋白，通过激活磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)，磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Ser50/Thr145)，激活糖原合成酶3(GSK3)，活化T细胞核因子的转换，释放炎性介质。也有研究报道，DP2被激活后偶联Gi蛋白，抑制cAMP水平，促进Ca2+ 内流，上调CD11b表达，诱导嗜碱性粒细胞迁移和脱颗粒，促进IL2、IL4、IL5、IL13的释放。Liang等[5]对天冬氨酸(NMDA)致原代海马神经元损伤进行了研究，发现DK睵GD2 加重神经元损伤。Schroder等[16]对炎性相关因子前列腺素H1(PGH1)进行了研究，发现CAY10471可抑制Th2细胞的迁移。结合本实验结果，DK睵GD2可能通过激动DP2，偶联Gi蛋白，增加细胞内Ca2+浓度，加重铝负荷原代培养大鼠海马神经元损伤;CAY10471可能通过抑制DP2活性，减少Ca2+流入，对铝负荷原代培养大鼠海马神经元损伤起一定保护作用。
综上所述，DP2 激活表达可增加神经元对铝盐损伤的易感性，其机制可能涉及DP2下游Ca2+信号通路的调控，但由于作用复杂，在神经系统中的机制尚不完全清楚。因此，在本研究的基础上，可对DP2在神经系统中介导的下游Ca2+信号通路的具体调控机制进行深入研究。
篇5：蛋白激酶在缺血大鼠海马神经元细胞中的保护作用论文
蛋白激酶在缺血大鼠海马神经元细胞中的保护作用论文
研究发现，缺血再灌注损伤是对组织造成损伤的主要因素，即再次恢复血液供应，缺血组织灌注时造成的微血管和实质器官的损伤，本研究旨在探讨糖皮质激素诱导的蛋白激酶1( SGK1) 在大脑缺血再灌注过程中可能的保护机制。
1 资料和方法
1. 1 样本来源本研究用细胞为培养后的1 日龄SD 大鼠神经元细胞。对SD 大鼠采用椎脱臼处死法处死，用75% 酒精浸泡消毒3 ～ 5 min; 取出海马神经元细胞进行培养。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 大鼠海马神经元细胞的额分离及培养选用1 日龄SD大鼠2 只。通过对大鼠进行消毒后处死，获取了SD 大鼠的海马细胞，并进行了体外培养。
1. 2. 2 已分离培养的SD 大鼠海马神经元细胞的免疫荧光鉴定采用海马神经元特异性抗微管相关蛋白2(MAP2) 抗体免疫荧光来显示分离和培养的结果，在显微镜下计数，记录每个视野中染色阳性的细胞占所有细胞的比值，超过95%的为阳性。
1. 2. 3 通过氧糖剥夺诱导海马神经元凋亡将海马神经元细胞根据氧糖剥夺诱导时间不同分为正常海马神经元细胞组，氧糖剥夺诱导120 min 组、氧糖剥夺诱导120 min 后正常恢复10 min组、氧糖剥夺诱导120 min 后正常恢复30 min 组和氧糖剥夺诱导120 min 后正常恢复60 min 组。采用Annexin VFITC/PI 流式细胞术对样品进行检测，区分实验样本中正常、坏死、凋亡细胞。
1. 2. 4 Western 印迹技术检测上述步骤中各种细胞的SGK1 表达实验对样本进行总蛋白提取与定量，根据SGK1 的mRNA序列( 序列号: NM_001193568. 1) 设计了该基因的全基因引物，获得目的基因SGK1 模板，构建质粒载体，并进行过表达效率检测。
1. 3 统计学方法采用SPSS16. 0 进行分析。
2 结果
2. 1 氧糖剥夺诱导海马神经元凋亡及SGK1 表达情况NC 代表未经任何处理的培养过的SD 大鼠海马神经元细胞、OGD 表示对培养过的'SD 大鼠海马神经元细胞进行了120 min 的氧糖剥夺，而10 min 组、30 min 组和60 min 组则表示培养过的SD 大鼠海马神经元细胞在进行了120 min 的氧糖剥夺之后分别进行了10 min、30 min 和60 min 的氧糖正常供给。
2. 2 SGK1 基因蛋白水平的过表达能阻止氧糖剥夺120 min 的培养过的SD 大鼠海马神经元细胞的凋亡与NC 组比较，转染SGK1 过表达载体的细胞内，可以SGK1 导致mRNA 的表达增加约5 倍; 在转染了SGK1 过表达病毒载体的细胞中，SGK1 基因在蛋白水平的表达约超过未处理组的2. 5倍。海马神经元分别转染了空载体或编码SGK1 基因的表达载体; 在转染24 h 后，
SGK1 在基因水平和蛋白质水平的变化情况和NC 相比具有显著性差异。海马神经元分别转染了空载体或编码SGK1 基因的表达载体24 h，然后进行120 min 的氧糖剥夺，然后使之恢复60 min; 运用流式细胞仪分析用膜联蛋白V/PI 双染色法来检测细胞凋亡情况。通过免疫印迹实验检测SGK1 和活化的金属基质蛋白酶(caspase) -3 蛋白水平差异情况。
3 讨论
缺血性脑血管病是目前导致人类，尤其是老年人致死和致残率最高的疾病之一。对于缺血性脑血管病当前最主要的治疗原则是对缺血区域进行血液灌注; 然而近期发现对缺血性脑血管疾病的缺血再灌注非但没有使组织功能恢复，反而会导致缺血所致的功能障碍和结构破坏进一步加重，这种现象即缺血再灌注损伤，在各种模式生物和人类研究中都得到了一致的结果。
本研究结果发现，对体外培养的SD 大鼠海马神经元细胞进行氧糖剥夺可导致SD 海马神经元细胞凋亡数量的增加，而之后随着再恢复氧糖供应时间的增加，神经元细胞凋亡的数据则呈现进一步加剧的趋势。而SGK1 的过表达则可以抑制SD大鼠海马神经元细胞因氧糖剥夺导致的细胞凋亡的趋势。另外本结果显示，SGK1 的过表达能显著降低因氧糖剥夺导致的SD 大鼠海马神经元细胞凋亡的数量，这一结果得到了荧光辅助细胞筛选分析的支持，提示Akt 和GSK-β 可对经受缺血再灌注海马神经元细胞能起到保护作用。
篇6：晚期糖化终末产物对大鼠海马神经元的损伤作用与机制
晚期糖化终末产物对大鼠海马神经元的损伤作用与机制
目的 研究晚期糖化终末产物(AGEs)对海马神经元存活、生长的影响和机制,以探讨AGEs在阿尔茨海默病发生中的作用.方法 取培养1 d的新生大鼠海马神经元,分为对照组和AGEs-BSA组.在含终浓度为100 mg・L-1、500 mg・L-1、2 000 mg・L-1的'牛血清白蛋白(BSA)或AGEs-BSA的培养液中培养24 h,显微镜下观察神经元形态变化,噻唑蓝(MTT)法测定神经元存活率,硫代巴比妥法测定神经元脂质过氧化物(LPO)含量.结果 100 mg・L-1BSA或AGEs-BSA条件下,2组海马神经元的形态、存活率及LPO含量均无明显差异(P>0.05).500 mg・L-1和2 000 mg・L-1条件下,AGEs-BSA组的海马神经元生长状况均较差,细胞存活率均降低(P<0.05,P<0.01),LPO含量均升高(P<0.05,P<0.01),且2 000 mg・L-1组上述变化更显著(P<0.01).结论 AGEs对体外培养的海马神经元有剂量依赖性损伤作用.过氧化应激是AGEs损伤海马神经元的途径之一.
作 者：赵长安 王悦芬 郭丽 许娜 李恩 作者单位：赵长安,郭丽(新乡医学院生物化学与分子生物学教研室,河南,新乡,453003)王悦芬,李恩(河北医科大学中西医结合研究所,河北,石家庄,050017)
许娜(新乡医学院形态学实验室,河南,新乡,453003)
刊 名：新乡医学院学报 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF XINXIANG MEDICAL COLLEGE 年，卷(期)： 25(3) 分类号：Q591.4 关键词：晚期糖化终末产物 海马 神经元 脂质过氧化物篇7：Bcl-2和Bax在缺血预处理保护海马神经元缺血再灌损伤中的作用
Bcl-2和Bax在缺血预处理保护海马神经元缺血再灌损伤中的作用
目的:探讨凋亡相关基因bcl-2和bax在缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)保护大鼠海马神经元缺血再灌损伤中的作用.方法:随机将动物分为IPC加缺血再灌组(IPC组)、单纯缺血再灌组(IR组)和对照组.观察海马CA1区神经元的组织形态学变化;TUNEL染色检测海马CA1区神经元凋亡;免疫组化测定海马CA1区神经元Bcl-2和Bax的`表达.结果:IPC组海马CA1区神经元存活数显著多于IR组,凋亡细胞数显著低于IR组,Bcl-2呈强表达,Bax表达不明显.结论:IPC诱导Bcl-2表达上调和Bax蛋白表达下调,可抑制凋亡的发生,对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用.
作 者：刘亚君 崔鹤 谢东萍 缪冰 刘克敬 陈连璧 LIU Ya-jun CUI He XIE Dong-ping MIAO Bing LIU Ke-jing CHEN Lian-bi 作者单位：刘亚君,谢东萍,缪冰,刘克敬,陈连璧,LIU Ya-jun,XIE Dong-ping,MIAO Bing,LIU Ke-jing,CHEN Lian-bi(山东大学医学院生理学研究所,山东,济南,250012)崔鹤,CUI He(山东医学高等专科学校生理学教研室,山东,济南,250022)
刊 名：山东大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES) 年，卷(期)： 44(3) 分类号：Q463 R743 关键词：基因,bcl-2 基因,bax 缺血预处理 海马神经元 脑缺血再灌损伤 大鼠,Wistar篇8：二氮嗪预处理上调Bcl-2/Bax蛋白比值减少缺氧复氧所致体外培养的海马
二氮嗪预处理上调Bcl-2/Bax蛋白比值减少缺氧复氧所致体外培养的海马神经元凋亡
线粒体内膜ATP敏感钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel, mitoKATP通道)的激活在药物预处理增强神经元对各种损伤的耐受力过程中发挥着重要作用.神经元内含有丰富的.mitoKATP通道,二氮嗪(diazoxide,DZ)为选择性的mitoKATP通道开放剂,本实验探讨了DZ预处理能否减少缺氧复氧所致的海马神经元凋亡,以及DZ如何调控Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达.原代培养9～10 d的Sprague-Dawley大鼠海马神经元随机分为5组:对照组、DZ 0 μmol/L、DZ 30 μmol/L、DZ 100μmol/L和DZ 100μmol/L+5-羟癸酸(5-hydroxydecanoate,5-HD)100μmol/L.除对照组外,其他四组神经元自缺氧前3 d开始,每天DZ预处理1 h,连续3 d.体外缺氧4 h,于复氧后24 h,四唑蓝比色法测定海马神经元存活率,annexin V-FITC流式细胞术测定凋亡率,Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达量.结果显示:与对照组比较,缺氧复氧损伤显著降低海马神经元的存活率,升高凋亡率.与其他浓度比较,100 μmol/L DZ预处理使神经元存活率升高约15%,而凋亡率降低约12%;Bcl-2蛋白表达增强约60%,Bax蛋白表达下降近30%.5-HD消除DZ对神经元的保护作用.因此,100μmol/L DZ可通过上调Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,减少缺氧复氧后海马神经元的凋亡.
作 者：刘荣国 汪炜健 宋娜 陈彦青 李立环 LIU Rong-Guo WANG Wei-Jian SONG Na CHEN Yan-Qing LI Li-Huan 作者单位：刘荣国,宋娜,陈彦青,LIU Rong-Guo,SONG Na,CHEN Yan-Qing(福建省立医院麻醉科,福州,350001)汪炜健,WANG Wei-Jian(温州医学院第一附属医院麻醉科,温州,325000)
李立环,LI Li-Huan(中国医学科学院,阜外心血管病医院麻醉科,北京,100037)
刊 名：生理学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA PHYSIOLOGICA SINICA 年，卷(期)：2006 58(4) 分类号：Q4 关键词：二氮嗪 凋亡 细胞缺氧 Bcl-2蛋白 海马 diazoxide apoptosis cell hypoxia proto-oncogene protein c-Bcl-2 hippocampus篇9：GDNF基因体内转染对大鼠面神经运动神经元的保护作用
GDNF基因体内转染对大鼠面神经运动神经元的保护作用
目的:研究GDNF基因体内转染对大鼠面神经损伤后运动神经元的保护作用,为基因治疗周围神经损伤提供依据.方法:用脂质体介导pEGFP-GDNF cDNA基因转染受损面神经所支配的'面肌,荧光显微镜和免疫组化法分别检测面肌和面神经运动神经元内GDNF的表达.计算损伤侧面神经元的存活率.结果:转染侧面肌细胞内有绿色荧光.面神经损伤后的第7、14、21和28d时间段,对照组面神经运动神经元的存活率分别为93.06%、76.06%、72.38%和70.69%,转染组分别为94.00%、84.00%、79.25%和78.06%.转染组面神经运动神经元GDNF的表达高于对照组.结论:面神经损伤后经脂质体介导GDNF基因体内转染靶器官后,对受损面神经运动神经元有保护作用.
作 者： 作者单位： 刊 名：中国临床解剖学杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ANATOMY 年，卷(期)：2006 24(4) 分类号：Q78 关键词：GDNF基因 面肌 面神经运动神经元
