应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

时间:2022年12月13日

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来源:杨乐多

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下面就是小编整理的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究,本文共5篇,希望大家喜欢。本文原稿由网友“杨乐多”提供。

篇1:应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

目的 应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白.方法 用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的.酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析.结果 应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白.初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用.结论 应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白.

作 者:钟彦伟 成军 郭风劲 曲建慧 纪冬 程勇前 李晓东 郭江 戴久增 王琳 徐东平ZHONG Yan-wei CHENG Jun GUO Feng-jin QU Jian-hui JI Dong CHENG Yong-qian LI Xiao-dong GUO Jiang DAI Jiu-zeng WANG Lin XU Dong-ping  作者单位:钟彦伟,曲建慧,纪冬,程勇前,李晓东,戴久增,王琳,徐东平,ZHONG Yan-wei,QU Jian-hui,JI Dong,CHENG Yong-qian,LI Xiao-dong,DAI Jiu-zeng,WANG Lin,XU Dong-ping(100039,北京,解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室)

成军,郭江,CHENG Jun,GUO Jiang(北京地坛医院传染病研究所)

郭风劲,GUO Feng-jin(重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室)

刊 名:中华实验和临床病毒学杂志  ISTIC PKU英文刊名:CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY 年,卷(期): 20(4) 分类号:Q5 关键词:酵母菌   杂交   干扰素β   结合蛋白  

篇2:酵母双杂交技术研究进展

酵母双杂交技术研究进展

酵母双杂交技术是一种有效的真核活细胞内研究方法,在蛋白质相互作用的研究方面得到了广泛的应用并取得了许多有价值的重要发现.作为一个完整的实验系统,它自建立以来经过了不断的`改进与完善,不仅进一步提高了实验结果的可靠性与精确性,而且在此基础上又发展了反向双杂交,三杂交及核外双杂交等多项技术.这些都将对功能基因组学和蛋白质组学的研究起到促进作用.

作 者:张迪 霍克克 顾科隆 赵翔 李育阳  作者单位:复旦大学遗传学研究所基因工程国家重点实验室,上海,33 刊 名:高技术通讯  ISTIC EI PKU英文刊名:HIGH TECHNOLOGY LETTERS 年,卷(期): 10(3) 分类号:Q93 关键词: 

篇3:用于筛选COPS3相互作用蛋白酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-COPS3

用于筛选COPS3相互作用蛋白酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-COPS3的构建及鉴定

目的 用COP岛基因片段构建酵母双杂交GAL4系统的诱饵载体pGBKT7-COPS3,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用.方法 运用RT-PCR技术从骨肉瘤细胞系SOSP-9607中扩增出COPS3基因片段,克隆入pUC19质粒,经测序正确后,插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒导入酵母菌AH109,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用.结果 成功获得COPS3基因片段,其表达蛋白对酵母菌AH109无毒性,对报告基因亦无激活作用.结论 可以利用酵母双杂交GAL4系统来研究与COPS3相互作用蛋白.

作 者:苏海川 赵玉红 陈军 张伟 李陕区  作者单位:苏海川,陈军,李陕区(第四军医大学唐都医院中心实验室,西安,710038)

赵玉红(第四军医大学基础部免疫学教研室)

张伟(第四军医大学基础部微生物学教研室)

刊 名:山西医科大学学报  ISTIC英文刊名:JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY 年,卷(期): 38(7) 分类号:Q781 关键词:基因,COPS3   酵母双杂交系统   报告基因  

篇4:酵母双杂交筛选与甲状旁腺素1型受体相互作用的蛋白

酵母双杂交筛选与甲状旁腺素1型受体相互作用的蛋白

目的:采用Clontech公司第3套酵母双杂交系统,筛选与甲状旁腺素1型受体(PTH1R)相互作用的蛋白.方法:将全长PTH1R基因克隆到载体pGBKT7作为诱饵,用LiAc介导将诱饵蛋白质粒pGBKT7-PTH1R和人肾cDNA文库质粒转化到酵母菌AH109中,检测Mell报告基因的表达,并进行相互作用的验证.结果:测序和相互作用验证结果表明SNAPIN在酵母系统中能特异地与PTHH1R相互作用;根据对SNAPIN基因的功能分析,其可能与细胞内钙稳态的调控有关.结论:为进一步研究PTH1R促进骨肉瘤进展的'机制提供了一定的线索.

作 者:刘俊丽 冯凯 路浩军 秦亚亚 张建中 LIU Jun-Li FENG Kai LU Hao-Jun QIN Ya-Ya ZHANG Jian-Zhong  作者单位:解放军306医院,病理实验科,北京,100101 刊 名:生物技术通讯  ISTIC英文刊名:LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年,卷(期): 21(2) 分类号:Q78 关键词:甲状旁腺素1型受体   酵母双杂交   相互作用   SNAPIN  

篇5:酵母双杂交筛选血液中与PERIOD1相互作用的新蛋白

酵母双杂交筛选血液中与PERIOD1相互作用的新蛋白

采用酵母双杂交方法,以人PER1的'PAS结构域为诱饵,在人血液cDNA文库中筛选能与之相互作用的蛋白.经酶切和核苷酸序列测定,证实重组诱饵载体hper1PAS/pGBKT7构建成功.血cDNA文库转化效率为1.4×106/3μg pGADT7-Rec.酵母双杂交文库营养缺陷筛选得到114个阳性克隆,β-半乳糖苷酶检测报告基因获得46个蓝色克隆.

作 者:胡丽娟 鲁芳 汪宇辉 刘德松 刘彦友 肖静 朱彬 郭慧玲 万朝敏 王正荣 HU Li-juan LU Fang WANG Yu-hui LIU De-Song LIU Yan-You XIAO Jing ZHU Bin GUO Hui-Ling WAN Chao-Min WANG heng-rong  作者单位:胡丽娟,汪宇辉,刘彦友,肖静,朱彬,郭慧玲,王正荣,HU Li-juan,WANG Yu-hui,LIU Yan-You,XIAO Jing,ZHU Bin,GUO Hui-Ling,WANG heng-rong(四川大学华西医学中心基础与法医学院生物医学工程研究室,成都,610041)

鲁芳,LU Fang(四川省医学科学院・四川省人民医院检验科分子遗传中心,成都,610072)

刘德松,LIU De-Song(四川大学华西医学中心基础与法医学院,形态学实验室,成都,610041)

万朝敏,WAN Chao-Min(四川大学华西妇产儿童医院儿科,成都,610041)

刊 名:四川大学学报(自然科学版)  ISTIC PKU英文刊名:JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE EDITION) 年,卷(期):2006 43(5) 分类号:Q5 关键词:近日节律PER1   蛋白相互作用   酵母双杂交  

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