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篇1：人早孕绒毛组织的体外原代培养和人滋养细胞株的建立
人早孕绒毛组织的体外原代培养和人滋养细胞株的建立
目的:建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外原代培养的方法以及建立人滋养细胞株和初步评价.方法:采用胰酶和胶原酶I混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜、透射电镜和免疫荧光激光共聚焦方法对培养出的细胞进行形态和骨架评价.结果:显微镜下可见细胞呈多边形,细胞平铺生长,有细胞融合后形成的合体滋养层细胞;透射电镜下可见细胞表面的微绒毛丰富;胞质丰富,内质网扩张明显,有丰富的糖原颗粒、髓样小体和明显的.脂滴,以及细胞间紧密的桥粒样结构连接;直接免疫荧光双标记染色检测到角蛋白18和波形蛋白均为阳性.结论:采用胰酶和胶原酶I混合消化法可获得较纯的滋养细胞,通过光镜、透射电镜和免疫荧光激光共聚焦检测细胞外形和骨架,确定该体外传至56代的细胞株为滋养细胞株.
作 者：张磊 门可 邵中军 王安辉 徐德忠 闫永平张景霞 李端 崔恒春 邵晨 作者单位：张磊,门可,邵中军,王安辉,徐德忠,闫永平,张景霞,李端,崔恒春(第四军医大学预防医学系流行病学教研室,西安,710032)邵晨(西京医院泌尿外科)
刊 名：现代妇产科进展 ISTIC PKU英文刊名：PROGRESS IN OBSTETRICS AND GYNECOLOGY 年，卷(期)： 15(2) 分类号：Q2-33 关键词：胎盘绒毛 原代培养 滋养层细胞株 早孕篇2：人腹膜微血管内皮细胞的原代培养
人腹膜微血管内皮细胞的原代培养
目的 分离和培养人腹膜微血管内皮细胞.方法 取非炎症且非转移性肿瘤患者施行腹部外科手术的大网膜组织,经Ⅰ型胶原酶消化,两次筛网过滤、离心等步骤获取人微血管段,接种24 h待内皮细胞从微血管段爬出贴壁后,去除微血管段获得内皮细胞进行传代培养.组织形态学观察及免疫组化法鉴定所培养的'细胞.结果 运用此法进行的原代培养,血细胞在换液和传代过程中被去除,成纤维细胞污染被减至最少;组织形态学观察显示内皮细胞呈铺路石样生长,免疫组化鉴定表明Ⅷ因子阳性;证实所培养的细胞为人腹膜微血管内皮细胞,其纯度较高,生长状态良好.结论 实验成功分离和培养了人腹膜微血管内皮细胞,为体外研究腹膜透析的病理生理学改变,提供了细胞来源.
作 者：袁江姿 方炜 倪兆慧 戴慧莉 钱家麒 YUAN Jiang-zi FANG Wei NI Zhao-hui DAI Hui-li QIAN Jia-qi 作者单位：上海交通大学医学院仁济医院肾脏科,上海,01 刊 名：上海交通大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE) 年，卷(期)：2006 26(10) 分类号：Q813.11 关键词：人腹膜微血管 内皮细胞 细胞培养篇3：人源性中性内肽酶稳定转染细胞株的建立
人源性中性内肽酶稳定转染细胞株的建立
目的:获得中性内肽酶(NEP)及失活中性内肽酶(inNEP)稳定表达的'细胞株.方法:用酶切及基因测序鉴定质粒pcDNA3.1-hNEP及pcDNA3.1-inNEP(E585V);以脂质体LipofectamineTM2000介导pcDNA3.1-hNEP及pcDNA3.1-inNEP(E585V)转染神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,分别获得两者的稳定表达细胞株;用RT-PCR及Western blot分析NEP的表达.结果:转染4周后,可见G418单克隆抗性细胞株形成,转染pcDNA3.1-hNEP及pcDNA3.1-inNEP(E585V)的细胞NEP表达均增高.结论:获得稳定转染pcDNA3.1-hNEP及pcDNA3.1-inNEP(E585V)的细胞株.
作 者：孔峰 胡晓燕 杨玲玲 丁岩 王丽娜 崔行 KONG Feng HU Xiao-yan YANG Ling-ling DING Yan WANG Li-na CUI Xing 作者单位：山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所,山东,济南,250012 刊 名：山东大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES) 年，卷(期)： 44(2) 分类号：Q785 关键词：中性内肽酶 阿尔茨海默病 基因治疗 转染 细胞转化,肿瘤篇4：人绒毛外细胞滋养层细胞与蜕膜基质细胞共培养模型的建立
人绒毛外细胞滋养层细胞与蜕膜基质细胞共培养模型的建立
目的模拟体内环境,建立可保持绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)与蜕膜基质细胞(DSC)生物学特性的共培养细胞模型,应用于研究滋养细胞的侵袭行为.方法利用胰酶消化和BSA、Percoll梯度沉降,收集纯化人早孕绒毛组织的EVCT和DSC,分别放入Transwell的上下小室,观察该模型下细胞形态变化及侵袭特性,免疫组化、免疫荧光染色检测细胞的纯度.结果免疫组化显示EVCT的细胞角蛋白7阳性表达的细胞数占95%以上,阳性表达转化生长因子β2的细胞数占95%以上,DSC泌乳素阳性表达的.细胞数也超过95%,证实共培养系统中EVCT和DSC纯度均在95%以上,且生物学特性得以维持.上室中的EVCT保持了其侵袭能力,在Matrigel包被的滤膜上EVCT的侵袭指数为3.22±0.04.结论适当的培养方法可获得高纯度的EVCT和DSC,并使其维持特有的生物学活性,成功地建立了共培养系统模型,便于研究滋养细胞侵袭和胚胎着床的机制.
作 者：秦立S 陈士岭 张曦倩 王炎秋 QIN Li-yun CHEN Shi-ling ZHANG Xi-qian WANG Yan-qiu 作者单位：南方医科大学南方医院妇产科生殖医学中心,广东,广州,510515 刊 名：南方医科大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)：2006 26(7) 分类号：Q492.5 关键词：绒毛外细胞滋养层细胞 蜕膜基质细胞 共培养 侵袭 Transwell篇5：人骨髓间充质干细胞体外培养及鉴定
人骨髓间充质干细胞体外培养及鉴定
目的:体外分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞(hBMSC).方法:利用密度梯度离心法分离出人骨髓单个核细胞(MNC),通过贴壁筛选法建立hBMSC的体外培养体系,并通过一系列检测方法对所培养的'细胞进行鉴定.结果:细胞主要呈“成纤维样”,但体积较大、形状不规则、细胞质突起多,细胞核大而疏松,核仁明显.流式细胞仪检测:CD34阳性率为2.09%、CD29阳性率为94.46%;CD54及CD105表达阳性.细胞周期及透射电镜检测提示细胞处于相对原始状态.免疫细胞化学染色显示:CD14、CD45、胶原蛋白Ⅱ呈阴性;CD106、CD166、纤维连接蛋白、波形蛋白及胶原纤维酸性蛋白呈阳性.细胞化学染色:糖原染色呈强阳性;碱性磷酸酶染色呈阴性.通过诱导分化培养可诱导出成骨细胞.结论:成功建立了稳定的hBMSC体外培养体系,按照此培养体系进行培养可获得hBMSC.hBMSC可传代培养,但在培养过程中细胞逐渐出现老化现象,且不能冻存.
作 者：梁雪 粟永萍 孔佩艳 陈幸华 彭贤贵 徐辉 曾东风 艾国平LIANG Xue SU Yong-ping KONG Pei-yan CHEN Xing-hua PENG Xian-gui XU Hui ZENG Dong-feng AI Guo-ping 作者单位：梁雪,孔佩艳,陈幸华,彭贤贵,曾东风,LIANG Xue,KONG Pei-yan,CHEN Xing-hua,PENG Xian-gui,ZENG Dong-feng(第三军医大学附属新桥医院血液科,重庆,400037)粟永萍,徐辉,艾国平,SU Yong-ping,XU Hui,AI Guo-ping(预防医学院解放军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038)
刊 名：医学研究生学报 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATES 年，卷(期)： 20(5) 分类号：Q813.11 关键词：人骨髓间充质干细胞 造血微环境 细胞培养篇6：不同来源人滑膜细胞体外培养的比较
不同来源人滑膜细胞体外培养的比较
目的 对滑膜细胞分离培养的不同实验方法进行比较研究.方法 取患者关节滑膜组织和游离的关节液,分别采用滑膜组织培养法和关节液培养法分离培养细胞,观察滑膜细胞的生长情况.结果 采用组织培养法获得的'滑膜细胞数量较多,细胞形态典型,增殖较快.关节液培养法培养的滑膜细胞,数量少,增殖慢,培养周期较长,所获得的滑膜细胞均能满足后续实验的需要.结论 两种方法各有优缺点,可达到互为补充的效果.在临床上可根据病人的情况进行选择.
作 者：蒋红 邢艳 杨明辉 李燕 JIANG Hong XING Yan YANG Ming-Hui LI Yan 作者单位：蒋红,邢艳,杨明辉,JIANG Hong,XING Yan,YANG Ming-Hui(川北医学院附属医院风湿免疫研究所,四川,南充,637000)李燕,LI Yan(中国人民解放军452医院风湿免疫科,四川成都,610075)
刊 名：四川解剖学杂志 英文刊名：SICHUAN JOURNAL OF ANATOMY 年，卷(期)：2009 17(2) 分类号：Q813.11 关键词：滑膜细胞 体外培养 传代
